茄根酸性组分对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞核因子kb表达的影响论文

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1、茄根酸性组分对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞核因子kB表达的影响论文.freelmatorymechanismoftheacidicponentsofaubergineroot.Methods:Inducedthemurineperitonealmacrophagesbythedissolubiltystarch，activatethemurineperitonealmacrophagesensuratethefluorescenceintensityetry.Results:After12hoursactivatedbyLipopolysaccharide，thod

2、el，theacidicponentsofauberginerootsignificantlyreducecontentofthePGE2.Conclusion:TheacidicponentsofauberginerootsignificantlyinhibittheCOX2activities.TheeffectofinhibittheCOX2，maybeamainanti-inflammatorymechanismfoftheacidicomponentsofaubergineroot.KeymatoryNuclearfacfor-kBMechanism茄根为

3、土家族常用药物，具有祛风利湿、清热止血、散瘀消肿等功效。临床用于治疗牙痛、风湿痹痛、冻疮等［1］。酸性组分是茄根抗炎的主要有效部位，对多种炎症，如关节炎、牙周炎等具有良好的治疗效果。为探讨茄根酸性组分的抗炎机理，我们就茄根酸性组分对核因子kB（NF-kB）表达的影响进行了研究。1实验材料药品:实验用茄根采自湖北省长阳土家族自治县蔬菜基地，待收获完茄子后采挖茄根，除去地上部分，洗净，切成厚片晒干备用。茄根经三峡大学植物学教研室陈芳清教授鉴定为茄科植物SolamummelongenaL。的根。碱提酸沉法制备酸性组分备用。DMEM培养基（BIBCO），新生小牛血清（BIB

4、CO），脂多糖（LPS）（Sigma），花生四烯酸（Sigma），可溶淀粉（浙江湖州市菱湖食品化工厂）。动物:C57BL/6小鼠，全雄，体重20～25g;由华中科技大学实验动物中心提供，合格证号:TJLA-2003-41。仪器:BeckMancoulterEPICSXL-4型流式细胞仪（美国贝克曼仪器公司），SanyoMc0175型CO2培养箱（日本三洋公司），BCM-1000型超净工作台（苏州净水仪器设备厂），石英SZ-93型自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂），电子天平MA200（上海第二天平仪器厂），YXQ-SG41.280型电热手提式压力蒸汽灭菌器（上海

5、医用核子仪器厂），KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），细胞培养板，0.22μm过滤器（华美生物工程公司）。2实验方法及结果2.1含药血清的制备［2］in，0.22μm滤膜除菌，加入DMEM培养基，配成20%含药血清培养液，-20℃保存备用。2.2腹腔巨噬细胞的培养C57BL/6小鼠腹腔注射1%的可溶性淀粉，每只lml。3天后断头处死。腹腔注射Hank's液8ml/只，无菌条件下洗出腹腔细胞1000r/min离心8min，细胞用Hank's液洗1次，作细胞计数，用含10%新生小牛血清的DMEM培养基调整细胞浓度至106cell/m1。将细胞接种于4

6、孔培养板中，每孔3ml，37℃，5%CO2。培养箱内培养6h。2.3NF-kB的测定［3］用Hank's液洗去末贴壁细胞，加入不含新生小牛血清的培养基，饥饿12h。换液，于培养板中加入3ml含药血清培养基，分组如下:阴性对照组、模型对照组加入含正常动物血清的培养基，阳性对照组（消炎痛）、药物高、低剂量组分别加入含药血清培养基;除阴性对照组外，其余各组同时加入刺激剂LPS，使其终浓度为1μg/ml培养12h:每孔加入细胞消化液（0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA1∶1混合）2ml进行消化，待细胞变圆、悬浮后，取消化液1500r/min离心5min;弃上清液，细胞用

7、PBS洗涤2次。加入1∶50兔抗人NF-kBP6550μl置4℃冰箱内过夜。用PBS洗涤3次，加入1∶100稀释的FITC标记的羊抗兔IgG50μl，4℃作用2h。用PBS洗涤2次，细胞移入专用管中，用流式细胞仪检测其平均荧光强度。结果见表1，图1。表1对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NF-kB表达的影响（略）3讨论NF-kB（nuclearfactor-kB）是一个多功能核转录因子，具有广泛的生物学活性，激活后可促进细胞因子、粘附分子、趋化因子等基因转录，在炎症反应中起重要作用。本研究以淀粉诱导的小鼠腹腔巨噬细胞为对象，以LPS为刺激剂，诱导NF-kB的表达，再