加速溶剂萃取技术提取定心藤中活性成分的研究

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1、加速溶剂萃取技术提取定心藤中活性成分的研究广州市药品检验所四分所广东广州510000作者简介：何凌云（1980—）,女，汉族，广东广州人，木科，广州市食品药品检验所四分所主管药师，研宄方向中药化学成分的提取与测定。【摘要】目的采用加速溶剂萃取技术（ASE）对传统瑶药定心藤中所含的雪松醇、芦丁、豆阐醇-3-0-β-D-葡萄糖苷三种化合物进行提取并优化提取方法方法用中心组合设计（CCD）对ASE中影响提取效率的参数进行优化，确定最佳条件后，分别与加热回流和超声法进行比较，根据HPLC分析所得结果，观察三者化合物提取总量间的差异结果ASE对定心藤中三个目标成分提取效率较传统方法高10

2、.45%〜15.76%（以总活性成分含量计），由统计分析结果可知，三者存在显著性差异。结论ASE法相较传统方法更为快速、高效，所得化合物总含量更高,因此具有更大的优势。【关键词】加速溶剂萃取技术；中心组合设计【中图分类号】R127.3【文献标识码】A【文章编号】1001-5213（2016）08-0376-01定心藤（MappianthusiodoidesHend.-Mazz.）为条茱與科植物甜果藤的干燥树藤（MappianthusiodoidesHand.-Mazz）。该类药材活性成分多种多样，其中，含量最为丰富，文献报道较多的为（+）-雪松醇，芦丁与色谱分析预实验中鉴定出的豆岀醇-3

3、-0-β-D-葡萄糖苷。然而，目前为止，对于定心藤活性成分的提取方法，仍停留在传统的硅胶柱层析、超声萃取等技术上。木研宄的目的在于考察及充分利用ASE的技术特点，高压条件下快速连续萃取，降低中药材提取中人工、能源与试剂消耗并简化操作。同时，通过提取效率对比，探寻其替代传统技术的可能性。1方法与结果1.1仪器、试剂和材料加速溶剂萃取仪为DionexASE350，昆山KQ-50DE超声净化仪，岛津LC-20A高效液相色谱仪（DAD检测器，迪马C18钻石柱，规格5μm，250mm×4.6mm）o乙醇购自上海化学试剂脊限公司；乙腈（色谱纯）购自默克公司；去离子水由Mi

4、UJ-Q系统制备。（+）-雪松醇与芦丁购自中国药品生物制品检定所，定心藤药材来源于广西壮族自治区金秀县山中，采集后晒干、切片保存，并经广西中医药研究院赖茂祥研究员鉴定为茶茱萸科定心藤（MappianthusiodoidesHend.-Mazz.）。1.2豆留醇-3-0-β-D-葡萄糖苷单体的制备由于未有标准品提供，故须自行制备苏单体。称取定心藤药材粉末50g，以5g为一份，置于ASE提取罐中，以130°C,30分钟，循环两次的提取操作，所用溶剂量为每5g药材50mL45%乙醇，合并所得提取液，旋转蒸发浓缩后，采用人孔树酯以10%（v/v,下同）、30%、50%、65%、75%、

5、95%乙醇各300mL,分三次洗脱，取洗脱液进HPLC后，得知该化合物在50%乙醇中含量最高，故将该部分合并，旋蒸浓缩后，挥干溶剂，即得橙黄色粉末状固体。1.3药材供试品的制备将同一批定心藤药材粉，分为9份，每份5g，平行操作。使用超声30min、加热冋流3h、ASE按1.2操作，三种方法各提取三份，提取溶剂均为45%乙醇50mL。1.4三种化合物的含量测定1.4.1高效液相色谱实验具体条件为：流动相A1%磷酸水溶液，B乙腈，采用梯度洗脱，梯度程序为：0〜40min15〜40%B,40〜50min40〜60%B,50〜60min60〜15%B，检测波长210nm,柱温25°C,流速0.8

6、mL/min<>峰1为（+）-雪松醇，2为芦丁，3为豆甾醇-3-0-β-D-葡萄糖苷1.4.2标准曲线绘制各取制备的活性成分对照品或单体10mg,精密称定，置于10mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度即得。取上述标准溶液，精密量取一定量至同一10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得1，2,5,10,20,50，100,200μg/mL的溶液，进样后记录峰面积。回归方程分别为（+）-雪松醇y=5670.9x+25679,芦丁y=23230x+15503，以及豆甾醇-3-0-β-D-葡萄糖苷y=9245.2x-3737.5,相关系数分别为r2=0.9997,0.9995和0

7、.9996。结果显示，该方法线性良好，在1〜200μg/mL范围内线性良好。1.4.3定心藤药材中各化合物的含量测定取定心藤药材粉5g，以1.2部分所述ASE条件提取后，直接进HPLC分析，记录各化合物峰面积。将峰面积代入标准曲线中，求得各化合物含量。1.5ASE条件对提取效率影响的考察除对不同提取方法进行比较之外，本实验还对影响ASE提取效率的温度、提取时间、提取溶剂及提取循环等四个因素进行了考察。根据中心组合（CCD）设计