四君子汤中活性成分的提取工艺研究

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1、四君子汤中活性成分的提取工艺研究陈常荣王恒黔南民族医学高等专科学校，贵州都匀558003【摘要】目的优选四君子汤中活性成分的提取工艺。方法以四君子汤中人参皂苷、多糖得率为评价指标，分别采用高效液相色谱法、苯酚-硫酸比色法测定人参皂苷和多糖含量，并采用综合评分的方式利用正交设计法优选最佳提取工艺。结果除提取次数外，影响四君子汤中活性成分提取的因素依次为液固比、提取温度和提取时间。结论最佳工艺参数为液固比12:1,提取温度95°C,提取时间2h,提取2次。【关键词】：四君子汤；活性成分；高效液相色谱法；苯酚-硫酸比色法；正交设计法；提取工艺四君子汤是治疗脾肺气虚的经典名方，始见

2、于宋代《太平惠民和剂局方》，由人参10g、白术9g、茯苓9g、甘草6g组成。研究文献表明，方中所含人参皂苷、多糖类成分具有显著的免疫调节、补气血、抗肝损伤、抗衰老、抗氧化、抗病毒等［1-4］作用，可视为处方的主要活性成分。现有的提取工艺研究均以单一活性成分作为评价指标，难以反映其所体现的整体效应。木实验以人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、人参皂苷Rbl和多糖得率作为评价指标，采用高效液相色谱法、苯酚一硫酸比色法分别测定人参皂苷和多糖含量，并采用综合评分的方式利用正交设计法优化其提取工艺，综合评价复方的内在质量，优选的提取工艺可为四君子汤的制剂牛.产及临床应用研究提供实验性理论基

3、础。1仪器和试药1.1仪器：Agilentl200型高效液相色谱仪及色谱工作站（美国Agilent公司）；TU1800S型紫外分光光度仪（北京普析通用仪器有限责任公司）；MettlerAE240电子天平（瑞士）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械三厂）；DHG-9240A真空干燥箱（上海金山）；2.0R大容量低速离心机（德国）。1.2试药：人参皂苛Rgl（中国药品生物制品检定所，批号：110703-201027），人参皂苷Rbl（中国药品生物制品检定所，批号：110704-200912），人参皂苷Re（中国药品生物制品检定所，批号：110754-200822），葡萄糖标准品（中国

4、药品生物制品检定所，批号：110833-200503），甲醇（色谱纯），水（超纯水），苏他试剂均为分析纯，药材饮片购自贵州省同济堂，经按照2010版中国药典一部相应药材项下内容鉴定为正品。2方法与结果2.1实验样品的制备：按四君子汤处方（人参10g、白术9g、茯苓9g、甘草6g＞称取药材饮片34g，按正交设计表安排实验，加水提取，合并提取液，离心5min（2×103r•min-l）,分取上清液，Sevag法［5］除去蛋白，浓缩，放冷，转移置200mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，并按下述方法进行测定。2.2人参皂苷含量测定2.2.1色谱条件：Pr

5、omosilC18色谱柱（5μm,4.6x250mm）；检测波长为203nm。以乙腈为流动相A,以水为流动相B，进行梯度洗脱：0-35min:19%A（81%B）；35-55min:19%A→29%A（81%B→71%B）；55-70min:29%A（71%B）；70-100min:29%A→40%A（71%B→60%B）；流速ImL/min；柱温25°C;进样量10μL;理论板数按人参皂苷Rgl，峰计算应不低于6000。2.2.2对照品溶液制备：精密称取人参皂苷Rgl、Re、Rbl对照品适量，加甲醇制成每ImL含Rgl0

6、.205mg、Re0.212mg、Rbl0.266mg的混合对照品溶液，摇匀，即得。2.2.3供试品含量测定：分别精密吸取人参皂苷对照品溶液、供试品溶液各10μL注入色谱仪，测定，即得。2.3多糖含量测定［6］2.3.1对照溶液的制备:精密称取105°C干燥恒重的标准葡萄糖约20mg,精密称定，置100mL量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀后即得浓度为0.2mg•mL-l的标准葡萄糖溶液。2.3.2标准曲线的制备：精密吸取浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL对照品溶液各2mL置25mL刻度试管中，加入5%苯酚溶液l.OOmL,摇匀，迅速滴加浓硫酸5

7、.00mL,加水至总体积10mL,摇匀，静置5min，置沸水浴中加热15min,再置冷水浴中lOmin，补充失去的水分至刻度。以2mL蒸馏水同法操作作为空白对照，在490nm处测定吸光度。以浓度（X）为横坐标，吸光度（丫）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为:Y=0.0048+16.45X,（r=0.9997,n=6）。实验结果表明，多糖含量以葡萄糖计，在0.02025〜0.10147mg范围内与吸光度呈良好线性。2.3.3供试溶液的制备：精密吸取“2.1”项下样品溶液2mL,加入8mL无水乙醇，混匀，离心5min（