cpgn odn对cpgs odn诱导hpbmc释放tnfα的抑制作用论文

《cpgn odn对cpgs odn诱导hpbmc释放tnfα的抑制作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、CpGNODN对CpGSODN诱导hPBMC释放TNFα的抑制作用论文蒋为薇王良喜丁国富余双江【摘要】目的明确抑制性CpGODN208(CpGNODN)对刺激性CpGODN1826(CpGSODN)诱导单核/巨噬细胞分泌TNFα的影响，为通过拮抗细菌DNA达到防治脓毒症的目的提供实验依据。方法选用本室前期筛选出的对CpGSODN活化RAC释放TNFα的影响；应用流式细胞术观察CpGNODN对CpGSODN与hPBMC表面结合和内化的影响。结果浓度比为1∶1的CpGNODN对刺激性CpG

2、SODN诱导hPBMC分泌TNFα具有抑制作用，并呈一定时效关系；CpGNODN对CpGSODN在hPBMC细胞表面的结合和内化具有抑制作用。结论CpGNODN对CpGSODN活化hPBMC具有抑制作用，这个作用可能与其影响hPBMC的表面结合和内化CpGSODN有关。【关键词】脓毒症抑制性CpGODN刺激性CpGODNTNFα表面结合内化ABSTRACTObjectiveTostudytheinfluenceofCpGODN208(CpGNODN)onTNFαreleasefromhP

3、BMCinducedbyCpGSODN1826(CpGSODN).MethodsCpGNODN,selectedbythepreviousRACinducedbyCpGSODNeasuredbyELISA.TheeffectsofCpGNODNonthesurfacebindingandinternalizationofCpGSODNetry.ResultsCpGNODNcouldinhibitTNFαreleasefromhPBMCinducedbyCpGSODNattheconcent

4、rationratio1∶1inatimedependentmanner.CpGNODNcouldinhibitthesurfacebindingandinternalizationofCpGSODN.ConclusionCpGNODNcouldinhibitTNFαreleasefromhPBMCinducedbyCpGSODN,icinflammatoryresponsesyndrome，SIRS)，由其发展来的多器官功能不全综合征(multipleorgandysfunctionsyndr

5、ome，MODS)病死率高达30%～50%.freelulatoryCpGmotif，CpGSODN)［3］。Krieg等通过对Adv2DNA、Adv5DNA、Adv12DNA和大肠埃希菌DNA发现部分CpGODN对细胞的刺激活性较弱，并能对CpGSODN活化细胞有抑制作用，因此推断这些序列可能是中和性CpG基序(neutralizingCpGmotif；CpGNODN)［4］。由于上述研究中发现的CpGNODN活性并不稳定，因此在Krieg的研究基础上，我们进一步寻找并得到有效的CpGNODN：

6、CpGODN208(5′TGCCGCGGCAGA3′)，CpGODN208对RAC)，观察CpGNODN对CpGSODN诱导hPBMC分泌TNFα的影响，进一步探讨其可能的作用机制。1材料和方法1.1材料全硫代修饰的CpGODN208(CpGNODN)：5′TGCCGCGGCAGA3′，由大连宝生物公司合成；全硫代修饰的CpGODN1826(CpGSODN)：5′TCCCTGACGTTCCTGACGTT3′和6FAM标记的CpGODN1826由上海博亚生物技术有限公司合成。淋巴细胞

7、分离液购自挪威AxisShield公司，比重1.077。RPMI1640培养液购自Hyclone公司，胎牛血清购自PAA公司。人TNFα检测试剂盒购自Bioscience公司。实验用移液管，吸管，离心管等玻璃器材均经260℃高温3h去热原处理；培养板购自BD公司，无热原，一次性使用。1.2hPBMC的分离按淋巴细胞分离液说明书进行，密度梯度离心法。无菌静脉穿刺采血，肝素抗凝。在8ml离心管中加3m1淋巴细胞分离液，取5m1抗凝血加到分离液液面上，2000r/min离心15min。小心吸取中间白膜层，转到

8、新的离心管内，用冷生理盐水洗涤2次，1500r/min离心6min弃上清，加2m1RPMI1640培养液(含10%胎牛血清、100u/ml青霉素、100u/ml链霉素)，吹匀制成细胞悬液备用。1.3CpGNODN抑制CpGSODN诱导hPBMC分泌细胞因子的作用调整hPBMC悬液浓度为1×106/ml，取0.2ml细胞悬液加于96孔板内，置37℃CO2温箱培养2h，同时加入0、10、20、30、40、50μg