CpGN ODN对CpGS ODN诱导hPBMC释放TNFα的抑制作用.doc

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1、CpGNODN对CpGSODN诱导hPBMC释放TNFα的抑制作用作者:蒋为薇王良喜丁国富余双江【摘要】目的明确抑制性CpGODN208(CpGNODN)对刺激性CpGODN1826(CpGSODN)诱导单核/巨噬细胞分泌TNFα的影响,为通过拮抗细菌DNA达到防治脓毒症的目的提供实验依据。方法选用本室前期筛选出的对CpGSODN活化RAW264.7细胞有抑制作用的CpGNODN,观察其对CpGSODN诱导hPBMC释放TNFα的影响;应用流式细胞术观察CpGNODN对CpGSODN与hPBMC表面结合和内化的影响。结果浓度比为1∶1的CpGNODN对刺激性

2、CpGSODN诱导hPBMC分泌TNFα具有抑制作用,并呈一定时效关系;CpGNODN对CpGSODN在hPBMC细胞表面的结合和内化具有抑制作用。结论CpGNODN对CpGSODN活化hPBMC具有抑制作用,这个作用可能与其影响hPBMC的表面结合和内化CpGSODN有关。【关键词】脓毒症抑制性CpGODN刺激性CpGODNTNFα表面结合内化ABSTRACTObjectiveTostudytheinfluenceofCpGODN208(CpGNODN)onTNFαreleasefromhPBMCinducedbyCpGSODN1826(CpGSODN).M

3、ethodsCpGNODN,selectedbythepreviousworkinourlab,caninhibitTNFαreleasefromRAW264.7inducedbyCpGSODN.TheinfluenceofCpGNODNonTNFαreleasefromhPBMCinducedbyCpGSODNwasmeasuredbyELISA.TheeffectsofCpGNODNonthesurfacebindingandinternalizationofCpGSODNweretestedbyflowcytometry.ResultsCpGNODNcould

4、inhibitTNFαreleasefromhPBMCinducedbyCpGSODNattheconcentrationratio1∶1inatimedependentmanner.CpGNODNcouldinhibitthesurfacebindingandinternalizationofCpGSODN.ConclusionCpGNODNcouldinhibitTNFαreleasefromhPBMCinducedbyCpGSODN,whichpartlyattributedtoinhibitionofCpGNODNonthesurfacebindingand

5、internalizationofCpGSODN.KEYWORDSSepsis;CpGNODN;CpGSODN;TNFα;Surfacebinding;Internalization脓毒症(sepsis)是一种严重创伤和感染的引起全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,SIRS),由其发展来的多器官功能不全综合征(multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS)病死率高达30%~50%,但目前尚无有效的防治措施[1]。细菌基因组DNA(细菌DNA)是SIRS的主要启动因子之一。未甲基化CpG的寡

6、核苷酸片段(CpGoligonucleotides,CpG6ODN)是细菌DNA的免疫刺激作用的最小作用单位,广泛存在于细菌DNA中[2]。细菌DNA之所以被哺乳动物视作异己成分而启动防御反应,是因为其有着与不如DNA明显不同的结构特征:细菌DNA中的CpG二核苷酸出现的频率约为1/16,而哺乳动物DNA中的CpG二核苷酸出现的频率仅为1/64,并且80%发生甲基化[3]。研究者们发现只有含有未甲基化CpG为核心的特定六核苷酸序列的CpGODN才具有刺激性,这些特定的六核苷酸被称为刺激性CpG基序(stimulatoryCpGmotif,CpGSODN)[3]。Krieg等通过对A

7、dv2DNA、Adv5DNA、Adv12DNA和大肠埃希菌DNA发现部分CpGODN对细胞的刺激活性较弱,并能对CpGSODN活化细胞有抑制作用,因此推断这些序列可能是中和性CpG基序(neutralizingCpGmotif;CpGNODN)[4]。由于上述研究中发现的CpGNODN活性并不稳定,因此在Krieg的研究基础上,我们进一步寻找并得到有效的CpGNODN:CpGODN208(5′TGCCGCGGCAGA3′),CpGODN208

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