aml－1-eto基因相关的aml－m2型白血病免疫表型分析论文

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1、AML－1/ETO基因相关的AML－M2型白血病免疫表型分析论文张建军杜欣黄志新苏健华周茂华【摘要】本研究探讨AML/ETO基因重排的FAB分型为AMLM2患者的骨髓免疫表型的特征和预测性，以及与急性早幼粒白血病（APL）的区别。应用流式细胞术分析17例经荧光原位杂交（FISH）检测AML1/ETO融合基因阳性、FAB分型为AMLM2（M2/ETO+）患者骨髓的免疫表型，并与34例AML1/ETO阴性、FAB分型AMLM3、临床诊断为APL患者进行了比较。结果发现，17例M2/ETO+患者骨髓中均可见一群（15.89%-68.53%）原始细胞和一群SSC较高异质

2、性的粒细胞。原始细胞表达干细胞相关抗原CD34、HLADR和髓系抗原CD33、CD13、MPO。在M2/ETO+患者中CD33表达强度显著低于APL患者（P0.001），HLADR、CD19和CD34+CD56+共表达的阳性率均显著高于APL患者（P0.001），而CD9的表达率则显著低于APL患者（P0.001）。M2/ETO+患者粒细胞表达分化的髓系抗原CD11b和CD15，并可分为CD15+CD11b-和CD15+CD11b+两群，而成熟的粒细胞标志CD10均为阴性.freelmunophenotypicFeaturesofAcuteMyeloidLeukemi

3、ayeloidleukemia(AMLM2)andisassociatediausuallyyelocyteleukemia(APL)inmorphology.InordertoinvestigatetheimmunophenotypiccharacteristicsofbonemarroentclassifiedbyFAB,immunophenotypeofbonemarroedbyfluorescenceinsituhybridizationetryasparedmunophenotypein34APLpatientsoreheterogeneousmyeloidc

4、ellscellassociatedantigensCD34,HLADRandmyeloidantigensCD33,CD13,MPO.ThemeanfluorescentintensityofCD33inM2/ETO+patientseanmatureeventsshoorematureCD15+CD11b+populations,theexpressionofmaturegranulocytesCD10ilartoAPLinexpressionfigure.ThegranulocytesexpressedCD56in17patientsentedtoexpressa

5、nexclusiveimmunophenotypethatshoultiparametricfloetryiasubtypeAML1/ETO基因相关的AMLM2型白血病免疫表型分析AML1/ETO融合基因是由染色体t（8；21）（q22；q22）易位累及21号染色体的急性髓系白血病基因1（AML1）和8号染色体的ETO（eighttACPROBEVA2.3FISH图象分析系统。形态学检查全部病例均经血象检查、骨髓形态学观察。血片与骨髓涂片经瑞氏染色，按血液学常规进行分型。AML1/ETO融合基因检测取EDTA三钾抗凝骨髓2ml，用0.075mol/LKCl低渗和甲

6、醇∶冰醋酸（3∶1）固定提取骨髓单个核细胞，用AML1/ETO和PML/RARα探针进行荧光原位杂交，然后用荧光显微镜和FISH图象分析系统进行结果分析。每例数200-500个细胞，计算出阳性细胞百分数。核型异常识别参照IS（1995）国际体系。免疫表型分析使用全血三色直接免疫荧光标记法进行染色。取EDTA三钾抗凝骨髓50μl注入试管里，加入FITC、PE和PreCP标记的单克隆抗体，充分混合，放置室温避光孵育30分钟。加入红细胞裂解液1ml，在室温下放置5-10分钟。200×g离心5分钟，去掉上清液，用PBS洗涤1次，加入0.5ml1%多聚甲醛缓冲液固定。胞浆内MPO

7、的染色首先标记表面抗体，加入裂解固定液，离心去掉上清，加入0.5ml透膜剂10分钟，以含1%FBS的PBS洗涤1次，加入MPO-FITC抗体孵育30分钟，用1%FBS的PBS洗涤，流式细胞仪检测。每次检测前先用CaliBRITEbeads３校准仪器。然后用CellQuest软件获取10000细胞，用CD45/SSC设门识别白血病细胞群和各有核细胞群，分析白血病细胞群在各种分化抗原的表达情况和图形。统计学处理应用SPSS13.0软件，用Chi-squaretest和Studenttest对M2/ETO+患者和APL患者各免疫表型