急性早幼粒细胞白血病免疫表型分析

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1、急性早幼粒细胞白血病免疫表型分析作者：杨芝红,白永泽,赵颖,王贵杰【摘要】目的探讨急性早幼粒细胞白血病细胞抗原表达的情况。方法采用三色荧光标记流式细胞仪检测33例FAB分型为AML-M3患者的骨髓。结果AML-M3患者CD45/SSC双参数散点图有其独特性，通常只可见两群细胞，其中正常淋巴细胞群比例减少，而幼稚细胞群所占比例增高且其SSC值较高，本研究中平均达90%以上。33例M3全部表达CD13、CD33，阳性率为100%，33例中2例分别表达CD34和HLA-DR，其表达阳性率各为3.0%，CD1

2、17表达百分比为63.6%，支持CD117在APL患者原始细胞表达较高水平的观点。结论三色荧光标记流式细胞术，CD45/SSC设门方法可将幼稚细胞与正常细胞区分开来，可特异地对幼稚细胞进行分析，极大地提高了APL免疫学分型的诊断准确率。【关键词】急性早幼粒细胞白血病;免疫表型;流式细胞术急性白血病(AcuteLeukemia，AL)是造血系统的一种恶性疾病。近年来随着单克隆抗体的不断开发及流式细胞术的广泛开展,急性白血病免疫表型研究得到迅猛发展,7并极大地提高了白血病诊断和分型的准确性。急性早幼粒细胞

3、白血病(APL)的生物学特征在AL中较独特，其免疫表型也较具特色。为了探讨APL的生物学特征及其表型特征，本研究采用三色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门方法对APL患者进行免疫表型分析，以了解APL细胞抗原表达的情况。　　1资料与方法　　1.1一般资料　　所有病例均为我院2006年1月-2009年5月血液内科与儿科收治的APL初诊住院患者，33例中男14例，女19例，年龄6～68岁，平均37岁。33例中肝肿大25/33例，脾肿大30/33例，淋巴结肿大25/33例，发热30/33例，33例均

4、有不同程度的出血。血象检查：三系减少31例，白细胞总数轻度增高(HGB、PLT减少)2例。血涂片白细胞分类25例以淋巴细胞为主，未见白血病细胞，8例可见30%～70%早幼粒细胞。骨髓象特征：骨髓有核细胞增生极度活跃6例，增生明显活跃24例，增生活跃3例，分类早幼粒细胞比值占52%～96%，平均80%，此类细胞多含有粗大或细小的大小不等的嗜天青颗粒，其中20例可见到Auer小体。所有患者骨髓及外周血涂片经瑞氏染色后分类计数，按FAB分型标准进行形态学分型。细胞组化染色包括髓过氧化酶(POX)染色、特异性

5、酯酶(AS-D)染色、非特异性酯酶(NAE)及氟化钠抑制试验。　　1.2仪器与试剂7为美国BD公司的FACSCaliber流式细胞仪，所有荧光单克隆抗体(McAb)及相关试剂均为BD公司产品，所用荧光包括FITC(异硫氰酸荧光素)、PE(藻红蛋白荧光素)和PerCP(叶绿素蛋白)，单抗选择，髓细胞系：CD13、CD33、CD14、CD15、CD117;T淋巴细胞系：CD3、CD5、CD7;B淋巴细胞系：CD10、CD19、CD20、CD22;非系列特异性抗体：CD34、CD45、HLA-DR。　　1.

6、3荧光标记染色方法采用直接免疫荧光标记法，所有病例治疗前抽取骨髓进行免疫分型。首先每管加入PerCP标记的CD45，然后加入FITC与PE标记的抗体，同时设定阴性对照(FITC-IgG2a与PE-IgG1)，各管加入抗凝骨髓，避光孵育、溶血素裂解红细胞、PBS洗涤，上机检测。　　1.4流式细胞仪检测与分析用Cellquest软件设置获取条件，依次上样获取数据，每管获取细胞数20000个，CD45/SSC双参数二维点图设门分析，计算幼稚细胞群中白血病细胞的表面标记。结果判定时以抗原表达量≥20%为阳性。

7、　　2结果　　2.1细胞形态学检查结果33例APL患者，M3a型22例，M3b型11例，POX染色阳性100%，AS-D染色阳性100%，NAE染色均不被NaF抑制。7　　2.2M3患者CD45/SSC、FSC/SSC双参数二维散点图见图1、2(见封2)。　　2.333例M3患者免疫学表型结果　　33例M3全部表达CD13、CD33，阳性率为100%，2例分别表达CD34和HLA-DR，其表达阳性率各为3.0%，CD117表达百分比为63.6%，9例表达CD15，阳性表达率为27.2%，1例表达CD1

8、4，阳性表达率为3.0%。表133例APL患者CD抗原表达情况　　3讨论　　白血病免疫学分型是利用McAb检测白血病细胞的细胞膜和细胞浆抗原，分析其表现型，以了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度，为临床合理治疗、判断疗效与预后提供重要的依据。随着流式细胞术的广泛应用，由于其客观准确、多参数、快速获取结果，且重复性好等优点，在白血病的诊断和分型方面具有7十分重要的作用。应用流式细胞术进行白血病免疫学分型现已成为研究急性白血病的基本手段之一，是传统形态