松花粉对人胚肺二倍体成纤维细胞p16及p21基因表达的影响论文

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1、松花粉对人胚肺二倍体成纤维细胞p16及p21基因表达的影响论文【摘要】［目的］研究松花粉对衰老细胞(2BS)内细胞周期蛋白激酶抑制剂p16INK4a及p21ethod］The2BScells28populationdoubling(PD)anddividedequallyintotheyoungcontrolgroup,oldcontrolgroup,middledosepinepollengroup(120mg/dl)andhighdosepinepollengroup(240mg/dl)randomly.Regulate

2、thephasesofcellcyclebyfloetry，andthentheexpressionofp16INK4a.freelRNAinedbysemiquantitativeRTPCR.［Result］TheamountofcellsinG1phaseiddledosepinepollengroup(72.73%±1.76%)andhighdosepinepollengroup(64.15%±0.87%)thaninoldcontrolgroup(81.33%±3.43%)noticeablely(P0.05).

3、Theexpressionofp16INK4amRNAinmiddledosepinepollengroup(0.3483±0.0078)andhighdosepinepollengroup(0.3222±0.0055)RNAinmiddledosepinepollengroup(0.7692±0.1749)andhighdosepinepollengroup(0.4451±0.0363)aybereactedviadecreasingtheexpressionofp16INK4aandp21EM培养基中，37℃,5%C

4、O2，饱和湿度培养箱中生长。细胞寿限为60～70代。至30代时随机取8瓶作为年轻对照组，至56代时随机取24瓶分成衰老模型组、松花粉中剂量组、松花粉高剂量组3组每组8瓶，分别以单纯完全培养基、120mg/dl含花粉血清培养基、240mg/dl的含花粉血清培养基培养8天［3］，收集细胞。配制松花粉血清液，使其终浓度分别为120mg/dl与240mg/dl。1.1.2仪器与试剂FACScan流式细胞仪(Beckmancoulter);PCR仪（ABI9700）；凝胶成像仪（BioRad）。类标准胎牛血清（FBS）购自民海生物，ME

5、M培养基（含非必需氨基酸、谷胺酰胺）为invitrogen产品。流式细胞周期检测试剂盒（上海杰美）；cDNA试剂盒（invitrogen，superscriptIII逆转录试剂盒）。1.2方法1.2.1细胞周期测定细胞培养至80％～90％融汇时，彻底收集细胞入15ml离心管，1500rpm,5min离心,去上清得细胞沉淀。再按细胞周期流式检测试剂盒说明进行操作。EXPO32ADC软件进行检测（美国BeckmanClouter），Multicycleforan,Clouter）软件行细胞周期分析。1.2.2RTPCR法检测p16

6、INK4a及p21期的顺序进行，细胞周期具有G1/S与G2/M两个调控点，其中G1/S点是启动细胞周期循环的关键。细胞衰老最显著的特征是细胞在很长一段时间内仍维持代谢活性，但因阻滞于G1期，失去了对有丝分裂原的反应和合成DNA的能力，不能进入S期。本研究采用自然衰老2BS细胞模型，观察松花粉的抗衰老作用，结果显示松花粉干预能明显改善衰老细胞出现的G1期细胞阻滞，提示松花粉在体外具有一定的抗细胞复制性衰老的作用。因此本研究进一步观察了细胞周期调控蛋白p16，p21在此过程中的可能作用。在衰老细胞中，其细胞周期蛋白（cyclin）、

7、细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）、细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子(CDKI)发生量与活性的变化。依据激活的CDKI的不同，可将衰老通路分为以下三条［6］，包括p16INK4a/RB,p19ARF/p53/p21olCellBiol，1996，16:859.［9］AlcortaDA，XiongY,PhelpsD，etal.Involvementofthecyclin2dependentkinaseinhibitaorp16INK4ainreplicativesenescenceofnormalhumanfibroblasts［J］.P

8、rocNatlAcadSciUSA，1996，93:13742.［10］JanakiramanK,ChadT,Matthearkerofaging［J］.JClinInvest，2004，114(9):1299307.［11］JiangmingD,Zongyu