开胸顺气丸微生物限度方法验证研究

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1、开胸顺气丸微生物限度方法验证研究郑敏路京赵静卫延明吕倩（渭南市食品药品检验所陕丙渭南714000）【摘要】目的：建立开胸顺气丸的微生物限度检查方法。方法：采用常规法，培养基稀释法进行计数方法验证，采用直接接种法进行控制菌方法验证。结果：可采用培养基稀释法（0.2ml/皿）进行细菌菌数检查，可采用常规法进行霉菌和酵母菌数检查；可采用直接接种法进行大肠埃希菌和大肠菌群的控制菌检查。【关键词】开胸顺气丸；微生物限度检查；方法验证【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）21-0388-021.仪器与材料

2、1.1仪器MJ-II型霉菌培养箱（上海一恒科技有限公司）；SPX-150型生化培养箱（上海金慧科电子有限公司）；SPX-250B-Z型生化培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）1.2材料1.2.1供试品开胸顺气丸批号150201，药品批准文号为国药准字Z61021232由陕丙利君现代中药有限公司生产。1.2.2试验菌试验用菌种枯草芽孢杆菌[CMCC（B>63501],金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003L大肠埃希菌[CMCC（B）44102],白色念珠菌[CMCC（F）98001L黑曲霉[CMCC（F）98003],均由陕丙省食品药

3、品检验所提供。1.2.3试药培养基营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基，肭盐乳糖培养基，MUG培养基，乳糖胆盐发酵培养基，改良马丁液体培养基，氯化钠蛋白胨缓冲液，以上培养基均由北京陆桥技术有限公司提供。稀释液：（1）0.9%无菌氯化钠溶液（用于菌液稀释）；（2）pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液（用于供试品制备）。1.方法与结果2.1实验菌液制备按照《中国药典2010年版一部》附录要求，采用10倍稀释法将5种阳性菌分别稀释至50〜100cfu/ml的菌悬液，备用。2.2供试液的制备取供试品10g,研细，加入到100mlpH7.0无菌氯化钠-

4、蛋白胨缓冲液中，振摇，使制备成1:10供试液，备用。2.3方法验证2.3.1计数方'法验证2.3.1.1常规法本法进行3次独立的平行试验，并计算各试验菌每次试验的冋收率。试验组:分别取供试液（1:10）1ml，菌稀释液（50cfu.mL-l〜100cfu.mL-l）lml注入培养基培养，采用平皿计数法，同法测定所加的试验菌数作为菌液组，测定供试品的本底菌数作为供试品对照组。结果见表1。表1细菌、霉菌和酵母菌冋收率试验结果（cfu/皿）木试验结果表明，采用稀释法（0.5ml/皿），金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的冋收率仍低于70%，而采用稀释

5、法（0.2ml/皿），金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的冋收率均高于70%,故采用培养基稀释法（0.2ml/皿）可消除供试品对这两种菌的抑制作用。2.3.2控制菌方法验证2.3.2.1直接接种法a.大肠埃希菌参照《中国药典2010年版一部》附录控制菌检查大肠埃希菌项下进行试验；结果见表3。表3大肠埃希菌检查方法验证结果木注：（+）表示呈阳性反应即产酸产气（一）表示呈阴性反应即不产酸产气表3、表4试验结果可以看出，试验组和阳性对照组均分别检出大肠埃希菌和人肠菌群；阴性对照组均未检出试验菌。可采用直接接种法进行控制菌人肠埃希菌和大肠菌群的检查。1

6、.讨论本实验对开胸顺气丸按《中国药典2010年版一部》附录微生物限度检查法要求，进行方法学验证试验，结果表明可采用培养基稀释法（0.2ml/皿）进行细菌菌数检查，可采用常规法进行霉菌和酵母菌数检查；可采用直接接种法进行控制菌的检査。本实验对由槟榔、牵牛子（炒）、陈皮、木香、厚朴（姜制）、三棱（醋制）、莪术（醋制）、猪牙皂多种中药材组成的处方药开胸顺气丸微生物限度检查法进行的方法验证，对提高检查方法的科学性和检验结果的准确性，提供了一定的依据。相关研究又表明开胸顺气丸中的槟郎、木香、厚朴等均有较强的抑菌性，槟榔提取物对革兰氏阳性细菌（G+）

7、和革兰氏阴性细菌（G-）都冇非常明显的抑制作用，而对真菌完全无抑制作用；木香对霉菌的抑制作用较明显；厚朴的抗菌作用较强，抗菌谱较广，对大肠杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌等引起人类的细菌和植物病原真菌均具冇较强的抑制作用。鉴于处方药开胸顺气丸具冇较强的抑菌性，但又不能确定其对微生物限度检查的干扰程度，因此处方中具体有多少成分有抑菌作用，抑制哪类菌，以及抑菌性的强弱还有待进一步研究。【参考文献】[1]国家药典委员会，中华人民共和国药典.北京:中国医药科技出版社,2010:附录79-86.