vegf 反义寡核苷酸抑制胆囊癌生长增殖和凋亡的体外实验研究

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1、VEGF反义寡核苷酸抑制胆囊癌生长增殖和凋亡的体外实验研究作者：庞作良,李海军,毛拉艾沙·买买提【摘要】目的体外研究Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸转染对胆囊癌GBCSD细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法运用Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotides，ASODN)和错义寡核苷酸(ScrambledOligodeoxynucleotide，SODN)转染人胆囊癌GBCSD细胞，MTT法测定转染后各组细胞的生长曲线及抑制率，流式细胞

2、术检测转染后不同时间各组细胞凋亡情况。结果SODN、SODN+Oligofectamine对GBCSD细胞生长无显著影响(P＞0.05)，而ASODN及ASODN+Oligofectamine则能显著抑制细胞生长(P<0.05)，且ASODN+Oligofectamine对细胞生长增殖抑制作用较ASODN组更为强(P<0.05)。流式细胞术检测结果发现ASODN+Oligofectamine能促进GBCSD细胞凋亡(P<0.05)。结论VEGFASODN转染能抑制胆囊癌GBCSD细胞生长和增殖，Ol

3、igofectamine介导能明显增强VEGFASODN的抑制作用；Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸转染能促进胆囊癌GBCSD细胞的凋亡。【关键词】胆囊癌细胞株GBCSD；VEGF；反义寡核苷酸；Oligifectamine；凋亡　　ExperimentofOligofectamineMediatedVEGFASODNTransfectiononGBCSDCellGroinemediatedVEGFASODNtransfectiononGBCSDcellgroediatedbyoligofect

4、amine.ThechangeoftransfectedGBCSDcellsgroetryinehadnodifferenceasparedine,thegrooreover,theeffectofASODN+oligofectamineoresignificantthanthatofASODN(P<0.05).TheresultsoffloetryrevealedASODN+oligofectaminecouldacceleratetransfectedGBCSDcellsapoptosis(P<0.05

5、).ConclusionVEGFASODNcouldinhibitGBCSDcellsgroinecouldstrengthentheeffectofASODN.　　Keyine;Apoptosis　　0引言　　VEGF通过与其特异性受体(VEGFR)结合，刺激血管内皮细胞增殖和迁移，促进新生血管生成，在肿瘤的生长和转移中起重要作用。抑制VEGFR信号转导通路的任何一个环节，就可能防止肿瘤的进展与转移。ASODN因有专一序列的寡聚脱氧核苷酸，故能特异阻断靶基因的复制、转录和翻译，是目前迅速发展的一种新型的基因治疗药物[1

6、]。Oligofectamine是一种专门用于寡核苷酸转染的阳离子脂质体，具有较高转染率。本实验体外运用Oligofectamine介导的VEGFASODN转染人胆囊癌GBCSD细胞,通过MTT和流式细胞术观察VEGFASODN对GBCSD细胞生长增殖和凋亡的影响。　　1材料和方法　　1.1材料人胆囊癌细胞株GBCSD（中科院上海细胞生物学研究所），四甲基偶氮唑盐（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）（宝泰克公司），ANNEXINV/PI凋亡试剂盒（CALTAG公司），OligofectamineTMReagent(2

7、0μM)（Invitrogen公司），VEGF反义寡核苷酸、VEGF错义寡核苷酸（上海生工生物工程公司），流式细胞仪(FACScan型)（美国BD公司）。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人胆囊癌GBCSD细胞用含10%小牛血清的RPMI1640培养液(含青霉素和链霉素各100μg/ml)，37℃，5％CO2培养箱培养。待细胞长满瓶底70％～80％时采用0.25％胰酶（含0.02％EDTA）消化传代，3～4天传代1次，取传代后24～48h处于指数生长期的细胞备用。细胞经0.4％台盼蓝染包，拒染率＞95％。　　1.2.

8、2寡核苷酸合成VEGF反义寡核苷酸及错义寡核苷酸序列参照　　2结果　　2.1MTT法测定SODN和OligofectamineTM对GBCSD细胞的毒性试验在12、24、48和72h4个作用时相点，对照组，2.5、5、10和20μmol/LSODN组及0.5、1、2和4μloligofectamine