盐酸甲氯芬酯对血管性痴呆大鼠bdnf表达的影响

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1、盐酸甲氯芬酯对血管性痴呆大鼠BDNF表达的影响1材料与方法1.1实验动物与试剂健康雄性SD大鼠45只，体重280～300g（贵阳医学院实验动物中心提供）。盐酸甲氯芬酯胶囊，广东先强药业有限公司产品（060106）。BDNF试剂盒由博士德生物工程有限公司提供。1.2动物模型制备及治疗方法将动物随机分为假手术组、模型组、用药组。采用改良Pulsinelli’s四血管阻断法建立VD大鼠模型。模型组和用药组烧灼双侧翼小孔内的椎动脉，造成永久性闭塞。24h后夹闭双侧颈总动脉5min,共夹闭3次，每次间隔1h。假手术组处理步骤同上，但不烧

2、灼椎动脉和不夹闭颈总动脉。动物清醒后，开始灌胃给药。用药组用盐酸甲氯芬酯100mg/（kg·d）溶于2ml水中灌胃，假手术组和模型组给予相同体积的水灌胃，连续4周。1.3免疫组织化学染色大鼠麻醉,经左心室插管，生理盐水冲洗、10%中性甲醛灌注固定，取大脑放入10%中性甲醛液中浸泡固定，常规脱水、石蜡包埋后行冠状位切片，片厚4～5μm。染色步骤：石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O2处理，热抗原修复，滴加5%BSA封闭液，滴加Ⅰ抗，湿盒内4℃孵育过夜，充分漂洗，加入相应生物素化Ⅱ抗，37℃孵育，漂洗后滴加试剂SABC，37℃孵育，P

3、BS洗涤，DAB显色，苏木素轻度复染，脱水，透明，封片。1.4图像分析及统计学处理用显微镜（德国Leica公司）和Mias2000图像分析系统采集图像并进行阳性细胞计数。在海马齿状回每张切片随机选取5个相邻视野，求出阳性细胞的平均值。用SPSS11.5统计软件，组间比较用单因素方差分析，统计结果以(x±s)表示。2结果BDNF阳性细胞表现为神经元的胞浆内有棕黄色颗粒。假手术组海马齿状回有少量BDNF阳性细胞（16.86±9.23）个/HP，模型组海马齿状回BDNF阳性细胞数量增加（28.85±5.07）个/HP，与假手术组比较

4、差异显著（P＜0.01）；用药组BDNF阳性细胞数也明显增多（40.08±5.75）个/HP，与模型组比较有差异（P＜0.05）。3讨论哺乳动物的海马是与学习记忆密切相关的部位，也是缺血损伤敏感脑区，脑缺血很容易造成海马损伤。脑反复缺血再灌注和长期慢性低灌流是VD的主要原因，本实验采用改良Pulsinelli’s四血管阻断法制备近似人类发病特点的VD模型大鼠[2]。BDNF是神经营养素家族成员之一，它不仅在中枢神经系统发育过程中对神经元的生存、分化、生长和维持神经元正常的生理功能起关键作用，而且还具有抗伤害性刺激，促进神经元损

5、伤后的再生等作用[3]，实验观察到脑缺血后海马齿状回BDNF表达比假手术组明显增高，说明脑缺血后齿状回通过调节内源性的BDNF表达，从而提高神经元抵抗缺血的能力。研究认为，盐酸甲氯芬酯能提高机体代谢能力，具有明显的抗脑缺血缺氧作用[1]。经盐酸甲氯芬酯治疗后的VD大鼠BDNF的表达进一步增强，BDNF能加强对脑缺血后神经元的保护作用，并促进损伤神经元的修复[4]，这可能是盐酸甲氯芬酯抗脑缺血的机制之一。【参考文献】[1]周瑾，唐希灿．氯酯醒的药理作用及治疗阿尔采默病的潜在前景[J]．上海医药，2001（8）345-346．[2

6、]姚国恩，王景周,陈曼娥.双侧颈、椎动脉阻断大鼠血管性痴呆模型的评价[J].重庆医学，2003（3）：336-337.[3]孙鹏飞，杜富会，周怀琪等.脑源性神经生长因子与脑缺血损伤[J].中国临床康复，2003（22）：3112-3114.[4]EndresM,FanG,HirtL,etal.IschemicbraindamageinmiceafterselectivelymodifyingBDNForNTgeneexpression.JCerebBloodFloetab,2000(1):139-144.