阿霉素人血白蛋白微球的制备及其工艺优化

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1、阿霉素人血白蛋白微球的制备及其工艺优化作者：张艳秋，徐多多，潘志，高阳,高其品【摘要】　　目的：应用新型工艺制备阿霉素人血白蛋白微球(ADRHASMS)，并优化其最佳制备工艺。方法：以阿霉素(ADR)、人血白蛋白(HAS)为材料，采用超声雾化化学交联技术制备ADRHASMS；并应用正交设计法确定其制备工艺。结果：所得微球光学显微镜观测呈球型,圆整,粒径分布范围为2～5μm,平均粒径为2.165μm,载药量、包封率分别为(3.174±0.137)，(75.11±3.127)。结论：本法工艺可实现连续地、批量化生产，既能满足工业化生产

2、要求，又可保证产品批量间的稳定性，具有良好应用前景。【关键词】阿霉素人血白蛋白微球制备工艺正交设计　　白蛋白微球(albuminmicrosphere)是由人或动物的白蛋白制成的粒径为微米级的球状物［1］。早期的白蛋白微球研究主要集中在放射医学领域,用于检查肺循环异常［2］。后来人们发现白蛋白微球不仅可生物降解,无毒性和抗原性，而且对亲水性药物有较高的负载能力，很适合用作药物载体，于是将其应用于药物制剂尤其是抗癌药物制剂的研究中［34］。本实验利用“白蛋白微球制备仪”，采用超声雾化化学交联剂法制备肝靶向制剂ADRHASMS，可通过控

3、制粒径实现靶向性。以粒径及其分布、载药量、包封率等为考察指标,在单因素考察的基础上，对影响ADRHASMS制备的各个因素采用正交设计多指标综合评价法对微球的制备工艺进行优化筛选，从而确定了其最佳处方工艺。　　1实验材料　　1.1试剂20%人血白蛋白(哈尔滨世亨生物工程药业股份有限公司)；注射用盐酸多柔比星(ADR)(浙江海正药业股份有限公司);25%戊二醛(天津市光复精细化工研究所，分析纯)；氢氧化钠(北京化工厂)；磷酸二氢钾(汕头市西陇化工厂)；胰蛋白酶(1∶250，宝泰克)；十二烷基硫酸钠(北京鼎国生物技术有限责任公司)；冰醋酸(

4、北京化工厂，分析纯)；色谱甲醇、色谱乙腈；其他试剂均为分析纯。　　1.2仪器501型超级恒温器(上海实验仪器厂有限公司);JR051型及JR031型超声波投入式雾化器(北京东方金荣超声电器有限公司)；HH1数显恒温水浴锅、852恒温定时磁力搅拌器(江苏省金坛市江南仪器厂)；A3S水流抽气机(上海爱朗仪器有限公司)；XSPBM生物显微镜(上海彼爱姆光学仪器制造有限公司)；LS13320MS制备超声雾化法是一种制备ADRHASMS的新方法，在超级恒温器中加入丙酮溶媒,在50S溶液，取阿霉素白蛋白微球混悬液加入酶解介质(内含0

5、.1%胰蛋白酶的pH7.4磷酸盐缓冲液),于37℃恒温水浴中温育，经裸眼观察混悬液完全转变为透明溶液，由显微镜验证所有微球完全消失，降解液过滤，取40μL进样，记录高效液相色谱仪测得的峰面积，带入回归方程得到阿霉素浓度。载药量(%)=测得微球中药物重量/微球重量×100%［6］。　　2.2.4包封率测定处理同2.2.3.2项下操作，测定微球中和丙酮溶剂介质中的药物含量［6］。　　2.2.5正交设计筛选最佳处方工艺根据单因素考察结果(数据略)得出,化学固化剂戊二醛浓度(Glutaral)(A)、搅拌速率(StirRate简化为S.R)(B)、

6、阿霉素与白蛋白质量比(ADR:HSA)(C)及白蛋白浓度(HSA/%)(D)是影响ADRHASMS主要因素，按L9(34)进行正交设计,以粒径(R1)、载药量(R2)、包封率(R3)为考察指标，进一步筛选制备ADRHASMS最优工艺［7］。　　2.3数据分析用SPSS10.0进行综合评分。　　3结果　　3.1微球形态、粒径及分布结果40倍光学显微镜下观察，微球均匀圆整，表面较光滑，分散性好；用激光粒度分析仪测定微球粒径分布范围为2～5μm，平均粒径为2.165μm，95%的微球粒径落在5μm内。　　3.2微球浓度测定结果3个批次微球

7、数目，计算得微球浓度为(1.2～1.5)×1015个/L，即(1.2～1.5)×1012个/mL(n=3)。　　3.3载药量测定结果　　3.3.1ADR线性回归方程根据实验数据及线性回归，得到CA标准回归方程为C=25318A-3030.3(R2=0.9999，r=0.9999)，结果表明在20～120μg/mL范围内浓度与吸收度线性关系良好。　　3.3.2ADR回收率、精密度经方法学考察，高、中、低3个浓度的平均回收率为99.57%，日内变异、日间变异系数均小于1%。　　3.4正交设计结果　　3.4.1正交设计因素水平表见表1。　　表1

8、正交设计因素水平表（略）　　3.4.2正交试验结果见表2。　　表2正交试验结果（略）　　3.5Z值综合评价法分析结果对实验结果进行直观分析，极差分析，确定影响因素的大小顺序是:C