p27mt基因对大肠癌lovo细胞粘附作用的影响

《p27mt基因对大肠癌lovo细胞粘附作用的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、p27mt基因对大肠癌Lovo细胞粘附作用的影响【摘要】目的研究人突变p27基因(p27mt)对大肠癌Lovo细胞粘附作用的影响，探讨p27mt基因在大肠癌Lovo细胞转移中的作用机制。方法用Adp27mt转染大肠癌Lovo细胞，采用TT法检测p27mt基因对大肠癌Lovo细胞同质粘附、异质粘附作用的影响。结果Adp27mt转染Lovo细胞后，同质粘附作用高于AdLacZ组和对照组，异质粘附作用低于AdLacZ组和对照组。结论上调p27mt基因的表达，可使大肠癌细胞间的同质粘附作用增强，异质粘附作用降低，因此，p27mt基因具有抑制大肠癌细胞转移的功能，其机制是改变了细胞基质及

2、细胞间的粘附能力。【关键词】p27mt基因；大肠癌Lovo细胞；同质粘附；异质粘附基金项目：十堰市科技局资助项目（2005ZD036）TheAdhesionEffectofColorectalCarcinomaLovocellsbyHumanMutantp27mtGeneSONGShimao1,CHENJun21.DepartmentofOncology,AffiliatedTaihe'sHospital,AffiliatedPeople'sHospital,YunyangMedicalCollege,Shiyan442000,China;2.DepartmentofGastroen

3、terologyCorrespondingauthor:CHENJun,Email:sycjsycatv.Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofp27mttransfectedintohumancolorectalcarcinomaLovocells,andtoexplorethemechanismofp27mtgeneonthemetastasesofcolorectalcarcinomaLovocells.MethodsTheexpressionofp27mtonthep27mttransfectedLovocellsinedp27mtprot

4、EinexpressiontgeneonthehomogenEItyadhesionofhumancolorectalcarcinomaeasuredinedbyMTTmethod.ResultsHighexpressionofp27onthep27mttransfectedLovocellogeneityadhesionofp27mttransfectedLovocellgrouptgenecanpromotehomogeneityadhesionandreduceheterogeneityadhesionofcolorectalcarcinomaLovocells.p27mtg

5、enemightfunctionasinhibitorofcolorectalcarcinomametastasis.Keytgene;ColorectalneoplasmLovocells;Homogeneityadhesion；Heterogeneityadhesionp27是一种多功能细胞周期素依赖激酶抑制因子(cyclindependentkinaseinhibitor,CDKI),其主要功能是通过阻止细胞G0/G1期至S期的转换，实现对细胞周期的负性调控，对肿瘤细胞有明显的生长抑制和促凋亡作用[1]。本研究旨在探讨人突变p27（p27mt）基因在大肠癌细胞转移过程中对肿瘤细胞

6、粘附作用的影响。1材料与方法1.1材料人大肠癌细胞株Lovo细胞购自武汉大学典型物保藏中心，人突变p27重组腺病毒（Adp27mt）由陈珺构建[2]，LacZ重组腺病毒（AdLacZ）由郧阳医学院临床医学研究所王家宁博士构建[3]，纤维粘连蛋白（FN）购于武汉大学医学院病理教研室，RPMI1640培养基，四氮唑蓝盐（MTT）为Sigma公司产品，小牛血清购自杭州四季青生物公司。I1640培养液中，置37℃，5%CO2湿化培养箱内培养，在倒置显微镜下观察生长情况，Lovo细胞3天传代1次。取对数生长期细胞，经5g/L胰蛋白酶消化，用PBS液或无血清RPMI1640培养液制成细胞悬液。

7、采用血细胞计数板计数，台盼蓝拒染法测定细胞活力，只有细胞活力大于95%以上方可用于实验。1.2.2腺病毒转染效率测定待Lovo细胞达到60%～80%融合，用AdLacZ转染，感染复数（multiplicityofinfection,MOI）分别为20、30、40、50，继续培养48h，经5g/L戊二醛固定15min，PBS洗2次后加入Xgal染液，37℃，50ml/LCO2培养箱内孵化4～24h计数蓝染细胞数。1.2.3OI=50）和Ad