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1、NK细胞对小鼠H张梅,吴迪，徐汇,贺鹏程，李静，习杰英，蔡瑞波，刘亚琳【关键词】杀伤细胞,天然;,骨髓移植;,移植物抗宿主病;,造血重建 EffectofNKcellonGVHDandhematopoieticreconstitutionafterH2haploidenticalbonemarroice 【Abstract】AIM:Toexploretheeffectofnaturalkiller(NK)cellongraftversushostdisease(GVHD)andhematopoieticreconstitutionafterH2haplo
2、identicalbonemarroice.METHODS:MurinemodelofH2haplotypemismatchedbonemarroouseasrecipient,andBalb/c(H2d)×C57BL/6(H2b)(H2d/b)mouseasdonor.LethallyirradiatedBalb/c(H2d)micearroatopoieticreconstitutionanifestations,pathologicalchangesandI1640液反复冲洗骨髓腔，0.83％NH4Cl裂解红细胞后，用RPMI1640洗涤2次,调整细胞
3、数为1×108/mL备用;脾脏于200目筛网上研磨滤过收集脾单个核细胞悬液,用0.83％NH4Cl裂解红细胞后,RPMI1640洗涤2次(作为T细胞),调整细胞数为1×108/mL备用. 1.2.3供鼠NK细胞的分离选择H2d/b小鼠脾细胞悬液为H2单倍体相合NK细胞的来源,无菌条件下分离20只H2d/b小鼠脾脏,用200目筛网研磨收集细胞悬液,400目筛网过滤后制成脾单核细胞悬液,用0.83％NH4Cl裂解红细胞,计数细胞数,调整细胞浓度为1×107个细胞/90μL缓冲液(磷酸盐缓冲液,pH7.2),按每107个细胞加入10μL抗NK细胞免疫磁珠(Mil
4、tenyiBiotec公司产品),4~8℃孵育15min后，用MiniMACS分选仪(MiltenyiBiotec公司产品)分选NK细胞,调整细胞数为5×106/mL备用.统计学处理：应用SPSS10.0统计包处理数据,多样本间均数比较用方差分析,率的比较用χ2检验.P0.05为差异有统计学意义. 2结果 2.1临床及病理表现单纯照射组均无脱毛、弓背体位、腹泻等GVHD的临床表现,移植后精神萎靡,体质量逐渐减轻,全部在2wk内死亡.肝、小肠和皮肤病理检查未见异常.骨髓细胞组移植后均无弓背体位、腹泻、脱毛等GVHD的临床表现,移植后初期有精神不振、体质量减
5、轻,但2wk后逐渐恢复活泼好动的习性,体质量亦恢复正常,存活均超过60d.人为处死取其肝脏、小肠和皮肤进行病理检查,未见GVHD病理改变.骨髓+T细胞组在移植后10d开始出现典型少食、少动、体质量减轻、弓背体位、毛发紊乱无光泽和腹泻等急性GVHD(aGVHD)症状,死亡高峰在15～30d,肝、小肠和皮肤病理改变符合典型的GVHD改变(图1A,B,C).骨髓+T+低浓度NK细胞组于移植后28～40d开始出现弓背体位、腹泻等GVHD表现,其小鼠肝、小肠和皮肤的病理表现符合中度GVHD改变.骨髓+T+高浓度NK细胞组仅10%(1/10)小鼠在移植后42d出现弓背体
6、位,其小鼠肝、小肠和皮肤的病理表现符合轻度GVHD改变. 图1骨髓＋T细胞移植小鼠GVHD的病理改变HE×200 略 2.2造血重建单纯照射组外周血,UrbaniE,etal.Effectivenessofdonornaturalkillercellalloreactivityinmismatchedhematopoietictransplants〔J〕.Science,2002,295(6):2097-2100. 〔4〕CooperMA,FehnigerTA,CaligiuriMA,etal.Biologyofhumannaturalkillerce
7、llsubsets〔J〕.TrendsImmunol,2001,22:633-640. 〔5〕RuggeriL,Shlomchik,etal.DonorvsrecipientallureactiveNKcellspreventGVHDbykillinghostAPCsinMHCdisparatehematopoietictransplants〔J〕.BoneMarroatopoieticstemcelltransplantationusingunrelateddonors〔J〕.Blood,2004,103:2860-2861. 〔7〕Murphyurp
8、hyethods,1996,9:344-351.
