结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜 egfr 及 pcna 表达的影响

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1、结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜EGFR及PCNA表达的影响:张永锋刘映芳张赵洁谭永港杨敏丁民【摘要】目的:观察结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜EGFR及PA表达的影响,从结肠黏膜修复角度探讨结肠康泰的药效机制。方法:雌性SD大鼠60只,随机分为4组,分别为正常对照、模型、柳氮磺胺吡啶(SASP)及结肠康泰组,以5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBs)诱导大鼠形成结肠炎症,免疫组化法观察EGFR及PA的表达。结果:结肠康泰组大鼠结肠黏膜EGFR及PA高表达,与模型组比较有显著性意义(P<0.05)。结论:上调EGFR表

2、达及细胞增殖水平是结肠康泰修复结肠黏膜损伤的愈合机制之一。【关键词】表皮生长因子受体;增殖细胞核抗原;结肠康泰〔Abstract〕ObjectiveToobservetheeffectofJiechangKangtai(JCKT)recipeonexpressionofEGFRandPAofcolonicmucosaincolitisratsandexplorethepharmacologicalmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaaleSDratslydividedintofour

3、groups,namelynormalcontrol,pathological,solfasalazine(SASP)andJCKTgroups.Experimentalcolitismodelinratsmunohistochemistry.ResultsTheexpressionofEGFRandPAinJCKTgroupaybeoneofmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaalgroalgroalgroin,滤出头煎,药渣加蒸馏水适量,再煮沸30min,滤出二煎,合并2次滤液,

4、浓缩成200%置冰箱。柳氮磺胺吡啶(SASP),上海三维制药有限公司提供,碾磨成粉,配成浓度为40mg/mL的混悬液;5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBs)购自Sigma公司;即用型鼠抗EGFR、PA抗体,福州迈新生物技术开发有限公司提供;即用型SABC免疫组化染色试剂盒等购于武汉博士德生物工程有限公司。1.2实验过程1.2.1造模方法[2]除正常组外,其余各组大鼠造模前禁食不禁水48h,禁食24h后提起鼠尾将其悬空,使挣扎以排出大肠远端的大便,共2次,每次相隔6h以上,以氯氨酮(0.2mL/100g)腹腔注射麻醉

5、大鼠,用外径为2mm的硅胶管插入鼠肛内约8cm,经管内注入5%2,4,6-TNBs0.4mL(100mg/kg)+50%乙醇0.25mL,约10s灌注完毕。1.2.2动物给药正常及模型组:每只每日给生理盐水2mL;SASP组:SASP剂量为0.8g·kg-1·d-1;结肠康泰组:结肠康泰剂量为20g·kg-1·d-1,从造模后第1天开始,按以上剂量给大鼠每天灌胃1次,连续14d。1.2.3标本的采集和处理至第15天,各组大鼠禁食8h后,用颈椎脱臼法处死大鼠,剖腹,取肛门至回盲部的结肠,沿肠系膜边缘纵形剖开,每只动物在

6、远端结肠、横结肠和升结肠处至少各取1块组织标本(2mm×10mm),另于有炎症或溃疡处至少取1块组织标本,常规石蜡包埋、切片。1.3观察指标与方法免疫组化ABC法检测EGFR、PA表达,根据试剂盒说明书进行操作。以PBS替代一抗体作为空白对照,已知阳性切片作为阳性对照。1.4统计学处理所有数据经SPSS10.0统计软件处理,各组资料用x±s表示,采用非参数统计方法Wilcoxon秩和检验比较各组资料间的差异,P<0.05为差异有显著性。2结果2.1判定标准2.1.1EGFR采用半定量积分法计算染色积分,即分别对

7、每张切片的阳性细胞及阳性细胞着色程度进行分级记分,结果以两项之和表示。阳性细胞率:每张切片检测5个视野(×400),所见的阳性细胞分为0~4级(共5级):0级为阴性,记0分;1级阳性细胞占1%~25%,记1分;2级阳性细胞占26%~50%,记2分;3级阳性细胞占51%~75%,记3分;4级阳性细胞占76%~100%,记4分。染色强度:显微镜下观察,仅细胞核着蓝色者为阴性,细胞浆或核膜上呈棕黄色为阳性;强度分0~3级(共4级):0级为阴性,记0分;1级为弱阳性染色,记1分;2级为阳性染色,记2分;3级为强阳性染色,记3

8、分。2.1.2PA采用增殖细胞指数表示,每张切片计算5个不同视野中1000个细胞中的PA阳性细胞数,以100个细胞中阳性细胞数来表示增殖细胞指数(PA-labelingindices,LI)。2.2各组大鼠结肠黏膜EGFR及PA的表达正常大鼠结肠黏膜存在少量EGFR及PA标记细胞。TNBs致大鼠结肠炎模型,结肠黏膜细胞EGFR表达及PA标记细胞

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