结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜 egfr 及 pcna 表达的影响论文

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1、结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜EGFR及PCNA表达的影响论文张永锋刘映芳张赵洁谭永港杨敏丁民【摘要】目的：观察结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜EGFR及PA表达的影响，从结肠黏膜修复角度探讨结肠康泰的药效机制。方法：雌性SD大鼠60只，随机分为4组，分别为正常对照、模型、柳氮磺胺吡啶（SASP）及结肠康泰组，以5%2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBs）诱导大鼠形成结肠炎症，免疫组化法观察EGFR及PA的表达。结果：结肠康泰组大鼠结肠黏膜EGFR及PA高表达.freelucosaincolitisratsandexplorethepharmacologicalmechanismsofrecov

2、eryofcolonicmucosaaleSDratslydividedintofourgroups,namelynormalcontrol,pathological,solfasalazine(SASP)andJCKTgroups.Experimentalcolitismodelinratsmunohistochemistry.ResultsTheexpressionofEGFRandPAinJCKTgroupaybeoneofmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaalgroalgroalgroin，滤出头煎，药渣加蒸馏水适量，再煮沸30min，滤出二

3、煎，合并2次滤液，浓缩成200%置冰箱。柳氮磺胺吡啶（SASP），上海三维制药有限公司提供，碾磨成粉，配成浓度为40mg/mL的混悬液；5%2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBs）购自Sigma公司；即用型鼠抗EGFR、PA抗体，福州迈新生物技术开发有限公司提供；即用型SABC免疫组化染色试剂盒等购于武汉博士德生物工程有限公司。1.2实验过程1.2.1造模方法2除正常组外，其余各组大鼠造模前禁食不禁水48h，禁食24h后提起鼠尾将其悬空，使挣扎以排出大肠远端的大便，共2次，每次相隔6h以上，以氯氨酮（0.2mL/100g）腹腔注射麻醉大鼠，用外径为2mm的硅胶管插入鼠肛内约8cm，经管内注

4、入5%2，4，6-TNBs0.4mL（100mg/kg）+50%乙醇0.25mL，约10s灌注完毕。1.2.2动物给药正常及模型组：每只每日给生理盐水2mL；SASP组：SASP剂量为0.8g·kg-1·d-1；结肠康泰组：结肠康泰剂量为20g·kg-1·d-1，从造模后第1天开始，按以上剂量给大鼠每天灌胃1次，连续14d。1.2.3标本的采集和处理至第15天，各组大鼠禁食8h后，用颈椎脱臼法处死大鼠，剖腹，取肛门至回盲部的结肠，沿肠系膜边缘纵形剖开，每只动物在远端结肠、横结肠和升结肠处至少各取1块组织标本（2mm×10mm），另于有炎症或溃疡处至少取1块组织标本，常规石蜡包埋、切片。

5、1.3观察指标与方法免疫组化ABC法检测EGFR、PA表达，根据试剂盒说明书进行操作。以PBS替代一抗体作为空白对照，已知阳性切片作为阳性对照。1.4统计学处理所有数据经SPSS10.0统计软件处理，各组资料用x±s表示，采用非参数统计方法matoryboweldisease,IBD）包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病，在IBD和实验性结肠炎中存在着免疫调节的缺陷，包括肠黏膜失去对肠腔的保护能力或是对肠黏膜损伤后的不适当修复，近年来研究发现，在结肠炎患者黏膜中EGF受体免疫活性明显增加，因而提示EGF在结肠黏膜的修复及防御功能中起重要作用4。已证明5，EGF的生物学效应是通过与细胞膜上的EG

6、F受体结合而发挥作用的，EGF与IBD的发病与治疗密切相关，EGF通过激活受体控制肠细胞的增生，目前认为正常成人胃肠道黏膜EGF受体仅存在于黏膜细胞基底侧面一面，急性黏膜损伤往往是EGF受体的增加，而慢性黏膜损伤会产生一个明显的细胞谱系产生EGF。增殖细胞核抗原（PA）是DNA多聚酶δ的辅基，其量的变化与DNA合成一致，在细胞增殖和DNA合成过程起重要作用，能直接反映细胞增殖状态，免疫组化标记增生期细胞核染色阳性，可作为细胞增殖活性的可靠标记物，其表达上调或下调提示细胞增殖水平的上升或下降。溃疡性结肠炎属中医的“泄泻”、“久痢”、“便血”等范畴，病机以脾气虚弱、湿热内阻、气滞血瘀为主，

7、后期可见脾肾两虚，气滞血瘀贯穿于整个病程中。结肠康泰以健脾益气、清热祛湿、凉血活血为治法，虚实兼顾，切中病机，标本兼治。本实验结果表明：结肠康泰上调结肠炎大鼠结肠黏膜EGFR的表达，黏膜细胞增殖增加，是其修复结肠黏膜损伤的愈合机制之一。【