结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜 egfr 及 pcna 表达的影响

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1、结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜EGFR及PCNA表达的影响：张永锋刘映芳张赵洁谭永港杨敏丁民【摘要】目的：观察结肠康泰对结肠炎大鼠结肠黏膜EGFR及PA表达的影响，从结肠黏膜修复角度探讨结肠康泰的药效机制。方法：雌性SD大鼠60只，随机分为4组，分别为正常对照、模型、柳氮磺胺吡啶（SASP）及结肠康泰组，以5%2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBs）诱导大鼠形成结肠炎症，免疫组化法观察EGFR及PA的表达。结果：结肠康泰组大鼠结肠黏膜EGFR及PA高表达，与模型组比较有显著性意义（P<0.05）。结论：上调EGFR表

2、达及细胞增殖水平是结肠康泰修复结肠黏膜损伤的愈合机制之一。【关键词】表皮生长因子受体；增殖细胞核抗原；结肠康泰〔Abstract〕ObjectiveToobservetheeffectofJiechangKangtai(JCKT)recipeonexpressionofEGFRandPAofcolonicmucosaincolitisratsandexplorethepharmacologicalmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaaleSDratslydividedintofour

3、groups,namelynormalcontrol,pathological,solfasalazine(SASP)andJCKTgroups.Experimentalcolitismodelinratsmunohistochemistry.ResultsTheexpressionofEGFRandPAinJCKTgroupaybeoneofmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaalgroalgroalgroin，滤出头煎，药渣加蒸馏水适量，再煮沸30min，滤出二煎，合并2次滤液，

4、浓缩成200%置冰箱。柳氮磺胺吡啶（SASP），上海三维制药有限公司提供，碾磨成粉，配成浓度为40mg/mL的混悬液；5%2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBs）购自Sigma公司；即用型鼠抗EGFR、PA抗体，福州迈新生物技术开发有限公司提供；即用型SABC免疫组化染色试剂盒等购于武汉博士德生物工程有限公司。1.2实验过程1.2.1造模方法[2]除正常组外，其余各组大鼠造模前禁食不禁水48h，禁食24h后提起鼠尾将其悬空，使挣扎以排出大肠远端的大便，共2次，每次相隔6h以上，以氯氨酮（0.2mL/100g）腹腔注射麻醉

5、大鼠，用外径为2mm的硅胶管插入鼠肛内约8cm，经管内注入5%2，4，6-TNBs0.4mL（100mg/kg）+50%乙醇0.25mL，约10s灌注完毕。1.2.2动物给药正常及模型组：每只每日给生理盐水2mL；SASP组：SASP剂量为0.8g·kg-1·d-1；结肠康泰组：结肠康泰剂量为20g·kg-1·d-1，从造模后第1天开始，按以上剂量给大鼠每天灌胃1次，连续14d。1.2.3标本的采集和处理至第15天，各组大鼠禁食8h后，用颈椎脱臼法处死大鼠，剖腹，取肛门至回盲部的结肠，沿肠系膜边缘纵形剖开，每只动物在

6、远端结肠、横结肠和升结肠处至少各取1块组织标本（2mm×10mm），另于有炎症或溃疡处至少取1块组织标本，常规石蜡包埋、切片。1.3观察指标与方法免疫组化ABC法检测EGFR、PA表达，根据试剂盒说明书进行操作。以PBS替代一抗体作为空白对照，已知阳性切片作为阳性对照。1.4统计学处理所有数据经SPSS10.0统计软件处理，各组资料用x±s表示，采用非参数统计方法Wilcoxon秩和检验比较各组资料间的差异，P<0.05为差异有显著性。2结果2.1判定标准2.1.1EGFR采用半定量积分法计算染色积分，即分别对

7、每张切片的阳性细胞及阳性细胞着色程度进行分级记分，结果以两项之和表示。阳性细胞率：每张切片检测5个视野（×400），所见的阳性细胞分为0~4级（共5级）：0级为阴性，记0分；1级阳性细胞占1%~25%，记1分；2级阳性细胞占26%~50%，记2分；3级阳性细胞占51%~75%，记3分；4级阳性细胞占76%~100%，记4分。染色强度：显微镜下观察，仅细胞核着蓝色者为阴性，细胞浆或核膜上呈棕黄色为阳性；强度分0~3级（共4级）：0级为阴性，记0分；1级为弱阳性染色，记1分；2级为阳性染色，记2分；3级为强阳性染色，记3

8、分。2.1.2PA采用增殖细胞指数表示，每张切片计算5个不同视野中1000个细胞中的PA阳性细胞数，以100个细胞中阳性细胞数来表示增殖细胞指数（PA-labelingindices,LI）。2.2各组大鼠结肠黏膜EGFR及PA的表达正常大鼠结肠黏膜存在少量EGFR及PA标记细胞。TNBs致大鼠结肠炎模型，结肠黏膜细胞EGFR表达及PA标记细胞