薄层色谱法鉴别康肾颗粒中茜草研究

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1、薄层色谱法鉴别康肾颗粒中茜草研究周翠兰曾晓燕姚远忠广州一品红制药有限公司，广东广州510760简介：周翠兰（1978-），女，硕士研究生，执业药师，从事新药研发工作。【摘要】目的：建立康肾颗粒中茜草的薄层色谱定性鉴别方法，为将茜草鉴别纳入其质量标准提供依据。方法：采用薄层色谱法对康肾颗粒中茜草进行定性鉴别。结果：在薄层色谱中，供试品溶液在与对照药材及对照品相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结论：本薄层色谱鉴别方法验证结果较好，专属性强、灵敏度高、重现性、耐用性好，可用于康肾颗粒的质量控制。.jyqkl，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水20ml、盐酸2m

2、l，加热20min，放冷，用乙酸乙酯20ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。2.2阴性对照溶液的制备按处方比例称取除茜草之外的其它药材，照康肾颗粒的制备工艺制成缺茜草空白颗粒，取缺茜草空白颗粒12g，照上述供试品溶液的制备方法同法制备成阴性对照溶液。2.3对照药材溶液的制备取茜草对照药材0.5g，照上述供试品溶液的制备方法同法处理，作为对照药材溶液。2.4对照品溶液的配制取大叶茜草素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。2.5TLC鉴别照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验［2］，吸取对照品、对

3、照药材溶液各2μl，阴性对照溶液、供试品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（10∶2∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。2.6方法验证2.6.1专属性照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，采用缺茜草阴性对照、对照品、对照药材进行实验，结果供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，本法专属性较好。2.6.2灵敏度照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，比较供试品不同点样量（1、2、5、10、15、20μl）对斑点的影响。结果随着点样量的增加，斑点的清晰度增加，点样1μl也能检

4、出，但斑点非常模糊，点样5μl以上斑点明显，点样到20μl薄层板有点超载，但斑点未拖尾，结果表明本方法灵敏度较好，点样量可以选择5~10μl。实验选择的是普通薄层板，使用高效板可减少点样量。2.6.3重现性照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，同时点样三个批号（批号：20140603、20140604、20140605）的样品，结果三批供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，本法重现性较好。2.6.4耐用性2.6.4.1不同厂家的薄层板考察照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，采用两个不同厂家的硅胶G薄层板及自制板进行点样，结果显示不同厂家的薄层

5、板Rf值有所差异，但不影响薄层鉴别。2.6.4.2不同相对湿度考察照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，平行点样四个薄层板，分别在RH18%、RH42%、RH65%、RH88%四个相对湿度条件下展开，比较TLC图谱的差异，结果RH18%~88%范围内检视结果良好，故常规实验室条件下相对湿度对此鉴别试验没有影响。2.6.4.3不同温度的考察照康肾颗粒茜草鉴别方法操作，平行点样三个薄层板，分别在5、25、35℃三个温度条件下展开，比较TLC图谱的差异，结果显示环境温度5~35℃不影响本品薄层鉴别。2.6.4.4检视时间的考察文献报道［4］，甲醇溶液中大叶茜草素在光照条件下含量明显下降，因

6、此在薄层板展开晾干之后，在实验室常规光照环境下，在0min、30min、1h、2h四个不同时间点观察了荧光强度，结果发现随着时间的变化，大叶茜草素的荧光强度下降，斑点颜色变淡，展开晾干后2h对照品斑点颜色明显变淡，供试品已经观察不到斑点。故建议样品配制后置于棕色试剂瓶中避光保存，薄层板晾干之后即刻观察。2.7结果供试品色谱中，在与对照品和对照药材相应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，色谱图见图1。3讨论康肾颗粒处方由12味中药组成，组分复杂，影响鉴别的干扰因素较多，样品的处理方法非常重要。试验甲醇提取、乙酸乙酯提取多种方法，最后确定采用甲醇提取，再乙酸乙酯萃取。采用茜草对照药

7、材、大叶茜草素对照品作为对照，对不同展开剂进行了筛选：（1）石油醚-丙酮（5∶1）；（2）乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（10∶28∶1∶0.5）；（3）二氯甲烷-乙酸乙酯-正已烷-甲酸-甲醇（20∶10∶8∶1∶0.5）。结果展开剂（2）操作方便，斑点分离清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。研究结果表明，所建立的薄层色谱鉴别方法对康肾颗粒中茜草的定性鉴别专属性强，提取方法和展开效果良好，方法灵敏度高，重现性、耐用性均达到鉴别检验要求，可较好地用于康肾颗粒的质量控制。本