egfrvⅲ、pik3ca和ddr2基因在中国肺鳞癌患者中基因状态的研究

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1、EGFRvⅢ、PIK3CA和DDR2基因在中国肺鳞癌患者中基因状态的研究第一章前言对于各种类型的晚期肺癌的治疗，传统上以化疗及放疗为主。肺腺癌和肺麟癌是肺癌最常见的两种类型。肺腺癌的IE向治疗在近年来已取得重大进展，各种祀向药物已进入临床，其在延长生存期及改善生活质量疗效已得到肯定。相比之下，肺麟癌的祀向药物治疗进展缓慢。最近，肺麟癌潜在的药物分子IE点表皮生长因子受体III型突变体（Epidermalgroainreceptortyrosinekinase2,DDR2)等，引起越来越多的学者高度关注，相关的研究也取得很大进展。在目前国外最新的肺

2、麟癌基因位点研究中，PeterHammerman⑴总结出肺鳞癌潜在的祀向位点有包括FGFR1，FGFR2,PIK3CA；PTEN，CD1,EGFR，DDR2,BRAF等。EGFRvIII、PIK3CA和DDR2的研究己成为热点，相关的临床研究以及药物实验正在进行。PIK3CA基因由一个编码85kDa的调节亚基和一个编码llOkDa的催化亚基组成，在染色体的位置为3q26.3，PIK3CA突变发生在人类多种肿瘤如结肠癌、肝癌、乳腺癌、肺癌等，由此PIK3CA成为人类癌症最常见的致癌基因之一。PIK3CA突变主要集中在位于9号外显子的E542K和E5

3、45K突变，位于20号外显子的H1047R突变。美国学者HiromasaYamamoto[5]等人用86个非小细胞肺癌细胞株、43小细胞肺癌细胞株及691肺癌标本进行PIK3CA突变的研究，他们采用PCR及双向测序方法进行基因突变分析，用real-time定量?〔11法评定/70/#及#，PCR阵列法分析PIK3CAmRNA的表达，用ELISA法行PI3K活性测定，并行)上海生物工程有限公司Marker上海生物工程有限公司6xDNALoadingDye上海生物工程有限公司PCR产物纯化回收试剂盒上海生物工程有限公司（SK1141)PCR引物上海生

4、物工程公司DAPI染液碧云天生物技术有限公司羊封闭血清上海英拜生物有限公司PBS液北京中杉金桥生物技术有限公司2.2新鲜组织DNA提取根据组织基因组DNA抽提试剂盒说明书进行操作：(1)首先将组织标本置于应用液氮预冷的研钵中研磨，20mg组织加入200ul缓冲液震荡至彻底悬浮(2)加入20ul蛋白酶K混勾后，56°C条件下摇浴1小时，并颠倒混勻样品2-3次(3)加入200ul缓冲液GB，充分颠倒混匀后，70°C放置10分钟，使液体变清亮(4)加入200ul无水乙醇，充分震荡混勻15s(5)将上述所得到的溶液加入吸附柱CB3中，12

5、000r离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。之后在向吸附柱CB3中加入500U1GD，12000r离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。(6)向吸附柱CB3中加入600ul漂洗液PDSquamousCellLungCancer:GenomicsandjygclanKE,ParkBH.MutationofthePIK3CAoncogeneinhumancancers.BrJCancer.2006;94:455-9.[3]EngelmanJA，LuoJ,CantleyLC.Theevolutionofphosphatidyl

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