碱性成纤维细胞生长因子及内皮细胞生长因子对兔韧带

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1、碱性成纤维细胞生长因子及内皮细胞生长因子对兔韧带【摘要】目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和内皮细胞生长因子(ECGF)对内侧副韧带(MCL)和前十字韧带(ACL)细胞增殖行为的影响。方法培养10周龄新西兰白兔内侧副韧带和前十字韧带细胞，在培养液中分别加入bFGF和ECGF，以XTT方法测定细胞的增殖行为。结果bFGF在1ng/ml时即对MCL细胞有显著的促增殖作用，5ng/ml时开始对ACL细胞有促进作用，其浓度达50ng/ml时，对两种细胞的促进作用最大。ECGF在3.125ng/ml时即对MCL细胞有显著的促增殖作用，其浓度达1

2、2.5ng/ml时对ACL细胞有促进作用。bFGF和ECGF在超过其最佳作用浓度后，随浓度升高促进作用不再增强。结论bFGF和ECGF可以促进韧带细胞增殖进而促进韧带创伤愈合。【关键词】碱性成纤维细胞生长因子;内皮细胞生长因子;韧带;细胞增殖　　【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectsofbasicfibroblastgromedialcollateralligament(MCL)andanteriorcruciateligament(ACL).MedthodsTheMCLandACLcellsoften

3、matureNeedia,thecellularproliferationethod.ResultsTheadditionof1ng/mlbFGFenhancedtheproliferationofMCLcellssignificantly,5ng/mlbFGFenhancedtheproliferationofACLcells,thisenhancementofproliferationofbothMCLcellsandACLcellsaximalintheconcentrationof50ng/ml.Theaditionof3.125ng

4、/mlECGFenhancedtheproliferationofMCLcellssignificantly,12.5ng/mlECGFenhancedtheproliferationofACLcells.TheefficacyofbFGFandECGFdeclinedgraduallyentouscellsandtheycanenhancethehealingofligamentousissueinjuries.　　【Keyent,proliferation,ECGF　　韧带损伤是膝部的常见运动创伤，尤以内侧副韧带(medialcollat

5、eralligament,MCL)和前十字韧带(anteriorcruciateligament,ACL)多见，MCL和ACL是维持膝关节稳定的重要韧带，其损伤可使膝关节丧失稳定性，引起功能障碍，甚至导致骨关节炎[21]。在中央实质部完全断裂后，MCL可自然愈合，有时不需手术介入;而ACL损伤后，即使手术缝合断端，其愈合率也较低。韧带损伤后的愈合过程与一般结缔组织相似，都经过急性炎症期、修复再生期和重塑或成熟期三个阶段[2]。研究表明[3]，在损伤韧带的局部存在着多种生长因子，它们被认为是韧带正常愈合过程的重要调节者。使用生长因子促进韧带愈合

6、是近年来研究的焦点之一。通过体外培养MCL和ACL细胞，分别加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和内皮细胞生长因子(ECGF)，以观察bFGF和ECGF对韧带细胞增殖的影响，为应用bFGF和ECGF促进韧带创伤愈合提供依据。　　1材料与方法　　1.1主要试剂bFGF(暨南大学生物医学工程研究所惠赠)，ECGF(Sigma公司产品，美国)，DMEM培养基及胰蛋白酶(Gibco公司产品)，胶原酶Ⅱ、XTT(Sigama公司，美国)，胎牛血清(杭州四季青生物有限公司),酶标仪(日本Reader)。　　1.2内侧副韧带和前十字韧带成纤维细胞培养无菌

7、切取兔龄10周新西兰白兔MCL和ACL，在含100μg/mlPG和100μg/mlSM双抗Hank’s液中剔除滑膜等外周组织，以眼科剪剪成1mm3左右的碎片。配制0.25%的胶原酶Ⅱ，将韧带组织移至胶原酶液中，37℃条件下消化1～2h，组织消化后，无血清DMEM培养液冲洗，离心，以含15%胎牛血清的DMEM培养液悬浮细胞，接种于一次性塑料培养瓶(Corning公司，美国)中，置于37℃、体积分数为5%CO2培养箱内培养。每3d换液一次，待细胞汇合后，以胰蛋白酶消化传代。　　1.3XTT法测定韧带细胞增殖收获第2～5代的MCL和ACL细胞，以5

8、×103/孔的浓度，接种于96孔培养板上，待细胞贴壁后，分别加入1、5、10、50、100及500ng/ml的bFGF和3.125、6.25、12.5、25、50及