嘌呤核苷酸对海洛因处理过大鼠c6神经胶质瘤细胞增殖的影响

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1、嘌呤核苷酸对海洛因处理过大鼠C6神经胶质瘤细胞增殖的影响作者：李鸿梅李昆何海涛刘剑凯洪敏【摘要】　　目的探讨海洛因及嘌呤核苷酸对大鼠C6神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠C6神经胶质瘤细胞，分别以不同浓度的海洛因及嘌呤核苷酸处理细胞，MTT比色法检测海洛因和嘌呤核苷酸对细胞增殖的影响。结果MTT实验表明，海洛因对大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖有抑制作用，120mg/L海洛因作用24h对C6细胞的抑制率达52%，并表现为剂量依赖性；嘌呤核苷酸对C6细胞的增殖有促进作用，120mg/L嘌呤核苷酸作

2、用24h，细胞增殖率为30%，并表现为剂量依赖性。结论海洛因抑制大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖；嘌呤核苷酸促进大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖，并在某种程度上对抗海洛因对C6细胞增殖的抑制作用。【关键词】嘌呤核苷酸；海洛因；神经胶质瘤细胞；细胞增殖。【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofheroinandpurinenucleotidesontheproliferationofC6gliomacells.MethodsTheeffectsofheroina

3、ndpurinenucleotidesontheproliferationofC6gliomacellsacellsinvitro，52%C6gliomacellsg/Lheroinfor24h；purinenucleotidespromotedtheproliferationofC6gliomacells，30%C6gliomacellsotedg/Lpurinenucleotidesfor24h.ConclusionsHeroininhibitstheproliferationofC6gliom

4、acells，purinenucleotidespromotestheproliferationofC6gliomacells.【Keyacells；Proliferation　　由于大鼠C6神经胶质瘤细胞膜上存在阿片受体，目前已被广泛用作研究各种阿片类药物作用机制的模型系统〔1，2〕。本实验室研究发现，海洛因不但能够抑制大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖，而且还能使细胞内嘌呤核苷酸分解代谢增强〔3，4〕。已经明确的是海洛因对C6神经胶质瘤细胞的增殖有抑制作用，但是嘌呤核苷酸对经过海洛因处理过的大鼠C6神

5、经胶质瘤细胞的增殖是否有影响并未见报道。本实验在前期研究发现的基础上，以大鼠C6神经胶质瘤细胞作为靶细胞，研究嘌呤核苷酸对海洛因处理的大鼠C6神经胶质瘤细胞增殖的影响，探索嘌呤核苷酸治疗阿片类成瘾的潜在机制。　　1材料与方法　　1.1材料和仪器　　C6细胞株购自上海细胞研究所。低温台式离心机购自上海化工机械厂。倒置显微镜购自上海蔡康光学仪器有限公司。CO2培养箱购自日本SANYO公司。超净工作台购自苏州尚田洁净技术有限公司。DMEM培养基购自Gibco公司，新生牛血清购自天津血液研究所。噻唑蓝(MT

6、T)、一磷酸腺苷AMP和一磷酸鸟苷GMP购自Sigma公司。海洛因(纯度为99%)由吉林省公安厅提供，临用时用灭菌三蒸水溶解。　　1.2大鼠C6神经胶质瘤细胞培养　　C6为贴壁生长的细胞。培养基为DMEM，每100ml培养基含青霉素1万U，链霉素10mg，新生牛血清15ml，用灭菌的5.6%NaHCO3溶液调pH7.2，置于CO2孵箱，37℃、5%CO2条件下培养。细胞生长至近融合状态时，用0.25%胰酶消化传代，每周2～3次。　　1.3MTT比色法检测海洛因对　　C6细胞增殖的影响及最佳药物剂量筛

7、选将处于对数生长期的细胞，用0.25%胰酶消化，用吸管将细胞吹打成单细胞悬液，血细胞计数板计数；将细胞以1×104个/cm2的浓度接种到96孔细胞培养板中，每组均设3个平行孔。以生理盐水作对照，加入海洛因使其终浓度分别为10、40、80和120mg/L，37℃、5%CO2培养箱中培养24h后加入20μl浓度为5g/L的MTT，培养箱中继续培养4h；弃培养基，每孔加入DMSO200μl，室温振荡10min后，用酶标仪在波长490nm处测定吸光度值，计算细胞的生存率(%)=(各实验组OD值/对照组OD值

8、)×100%，绘制细胞生长曲线。　　1.4MTT比色法测定嘌呤核苷酸对海洛因处理细胞增殖的影响　　将处于对数生长期的细胞用0.25%胰酶消化，用吸管将细胞吹打成单细胞悬液，血球计数板计数；将细胞以1×104个/cm2的浓度接种到96孔细胞培养板中，每组均设3个平行孔。对照组为海洛因处理组，加入海洛因使其终浓度为120mg/L；嘌呤核苷酸处理组在加入120mg/L海洛因的同时，加入等摩尔混合的嘌呤核苷酸，使嘌呤核苷酸终浓度分别为10、40、80和120mg/L，37℃、