门诊乙肝患者和经拉米夫定治疗后乙肝患者基因分型和hbvp区耐药突变检测研究

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1、门诊乙肝患者和经拉米夫定治疗后乙肝患者基因分型和HBVP区耐药突变检测研究卢红梅(辽宁省丹东市传染病医院118002)【摘要】FI的：分析门诊乙肝患者和经拉米夫定治疗后乙肝患者在棊因分型、HBVP区耐药突变方面的区别。方法：选取120例乙肝患者作为研宄对象，其屮60例有过拉米夫定治疗史，纳入A组，60例未接受过拉米夫定治疗，纳入B组，对两组患者的HBVP区耐药突点、HBV分型进行检测、比较。结果：两组患考的HBV基因分型(B型、C型、D型、其他型)比较，差异均不具有统计学意义，P>0.05；A组屮，有2

2、6例的突变株存在于拉米夫定位点，占43.3%，B组有6例的突变株存在于拉米夫定位点，占10.0%,组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)o结论：接受过拉米夫定治疗的乙肝患者，多存在拉米夫定耐药株，未接受过治疗的乙肝患者也需实施耐药检测，以便为临床诊断、治疗提供指导依据。【关键词】HBVP区耐药突变点拉米夫定乙肝【中图分类号】R512.6+2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2014)01-0156-02乙肝是临床常见病、多发病，全球范围内的乙肝感染者数量高达3.5亿，每年约有100万人

3、因肝功能衰竭、肝硬化、肝癌死亡［1］。为探讨门诊乙肝患者和经拉米夫定治疗后乙肝患者在基因分型、HBVP区耐药突变方面的区别，本研宂分别对未接受治疗和接受拉米夫定治疗的乙肝患者进行了HBVP区耐药突点、HBV分型，现报道如下。1一般资料与方法1.1一般资料选取我院在2011年10月〜2013年10月收治的120例乙肝患者作为研究对象，所有患者均符合《病毒性肝炎防治指南》中的乙肝诊断标准，其中男性58例、女性62例，年龄在17〜66岁之间，平均(37.3±2.3)岁。其中60例为接受过拉米夫定治疗的

4、住院患者，纳入A组，60例为未接受过拉米夫定治疗的门诊患者，纳入B组。两组患者的其他类型肝炎病毒(庚型、戊型、丙型、甲型)检测，均为阴性。两组患者在年龄、性别方面比较，P>；0.05,差异无统计学意义，有可比性。1.2方法采集两组患者的静脉血(2ml)后，以干燥玻璃管保存，离心5分钟(1500r/min),采集上层清夜备用。取100μl血清样本，加入PEG6000(50μl、20%)，混匀后离心10分钟，吸出上清液(150μl),保留沉淀，然后加入裂解液(25μl),将沉淀调离管底

5、，吹洗5次。将沉淀打散后，温育(100°C)10分钟，再离心10分钟，转移上清液，获得DNA纯化溶液。采用荧光定量PCR技术、DNA测序技术进行HBV分型和HBVP区耐药突变点检。1.3统计学方法应用SPSS18.0统计学软件对研究数据进行处理、分析，相关数据比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果两组患者的基因分型比较，详见表1。由表1可知，两组患者的HBV基因分型(B型、C型、D型、•其他型)比较，差异均不具有统计学意义，P>0.05。表1两组患者的基因分型比较[n,%]基因型

6、A组(n=60)B组(n=60)B13(21.7)15(25.0)C42(70.0)40(66.7)D5(8.3)5(8.3)其他0(0.0)0(0.0)两组患者的HBVP区耐药突变点比较，详见表2。从表2可知，两组患者主要存在阿德福韦酯、拉米夫定耐药株。A组中，有26例的突变株存在于拉米夫定位点，占43.3%,B组有6例的突变株存在于拉米夫定位点，占10.0%，组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；A组有4例的突变株存在于阿德福韦酯位点，占6.7%,B组有3例(5.0%)，组间比较无显著性差异(

7、P>；0.05)；A组其他突变耐药株3例(5.0%),B组10例(16.7%)，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)o表2两组患者的HBVP区耐药突变点比较3讨论耐药性是乙肝病毒拮抗抗病毒药物发生的基因改变，病毒耐药性的产生会严重影响治疗效果，增加治疗难度［2］。据实验研究显示［3】，发生对拉米夫定耐药的rtM204V、rtL180M双变异或者rtM204l变异HBV病毒，对替比夫定的抗病毒应答率会降低1000倍以上。本次研究结果显示，A组与B组的HBV分型比较，无明显差异(P>0.05)

8、;但接受拉米夫定治疗的A组患者，广泛存在拉米夫定耐药株(43.3%),其中16例(26.7%)都为204位点突变。这一结果与国内相关文献报道相符［4］。本次研宄中所选取的接受过拉米夫定治疗的患者均为治疗超过1年的住院患者，研究结果也提示乙肝患者在接受拉米夫定治疗后，机体耐药性会明显提高，对于此类患者做耐药检测具有重大意义。本次研究结果显示，接受过拉米夫定治疗的乙肝患者，广泛存在多位点同时突变，通过基