TLR4诱导的凋亡在结直肠癌中的作用及机制

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1、中山大学硕士学位论文TLR4诱导的凋亡在结直肠癌中的作用及机制TLR4inducesapoptosisofcolorectalcancerthoughp38/caspase-3pathway姓名：何卉欣专业：内科学导师：尉秀清主任医师答辩委员会主席：答辩委员会委员：2015年5月21日中国.广州论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明

2、确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日中山大学硕士学位论文何卉欣，TLR4诱导的凋亡在结直肠癌中的作用中文摘要TLR4诱导的凋亡在结直肠癌中的作用及机制姓名：何卉欣专业：内科学导师：尉秀清主任医师摘要结直肠癌（colorectalcarcinoma，CRC）是目前世界第三大常见恶性肿瘤，同时为癌症死亡第四大原因。每年，全球范围内有多于100万的结直肠癌新增病例，死亡人数超过70万，其发病率及癌症死亡率均有逐年增长的趋势。结直肠癌的机制仍不清楚，但越来越多证据显示，结直肠癌的发生、发

3、展与先天性免疫密切相关。先天性免疫反应中非常重要的一员Toll样受体4（Toll-likereceptor4，TLR4）及其信号分子通路在结肠癌细胞发展过程中发挥着重要作用。因此，阐明TLR4于结直肠癌发展中的分子机制，揭示结直肠癌发病机制，寻找治疗结直肠癌新的药物靶点，达到有效防治结直肠癌的预期目的，具有重要的意义。本研究通过人体、动物模型及细胞这三个层面的研究，得到以下几方面的结果。1.在结直肠癌患者标本中，通过免疫组化法，我们观察到患者癌旁及癌组织I中山大学硕士学位论文何卉欣，TLR4诱导的凋亡在结直肠癌中的作用中文摘要

4、中TLR4表达高于正常人结肠黏膜细胞中TLR4的表达。2.动物实验中，我们使用DNA琼脂糖凝胶电泳及蛋白印迹实验，证实小鼠结肠癌细胞株CT26上有TLR4表达。同时，我们在裸鼠上构建CT26种植瘤模型，结果显示，给予裸鼠TLR4信号阻断剂CLI-095，肿瘤体积及瘤重增大及增加，细胞凋亡减少从而促进种植瘤生长；而给予TLR4激活剂LPS肿瘤体积及瘤重减小，细胞凋亡增加从而抑制肿瘤生长；但各组肿瘤细胞增殖水平相当。这表明，激活TLR4可诱导结肠癌细胞凋亡从而抑制肿瘤的生长，而阻断TLR4信号通路可减少结肠癌细胞凋亡从而促进肿瘤生

5、长。3.细胞实验中，我们分别加入LPS、CLI-095、LPS+CLI-095、DMSO（阴性对照）刺激CT26结肠癌细胞，24h后，收集细胞，检测凋亡、增殖及p38信号通路相关蛋白表达。研究显示，TLR4激活后将导致p38的磷酸化水平升高，从而导致结肠癌细胞凋亡增加。本课题通过对临床结直肠癌患者手术切除的组织样本的研究，发现癌组织及癌旁组织TLR4过表达。为了探索其升高的意义，我们首先验证了小鼠结肠癌细胞株CT26上表达TLR4；在裸鼠上构建CT26种植瘤模型，证实阻断TLR4信号通路后，细胞凋亡减少从而促进种植瘤生长，而激

6、活TLR4后肿瘤体积及瘤重减小，细胞凋亡增加从而抑制肿瘤生长。我们在细胞学实验中进一步证实，激活TLR4使下游通路中p38磷酸化增加，促进结肠癌细胞凋亡。本课题揭示了TLR4信号于结直肠癌中的作用及可能的分子机制，为确立TLR4/p38/caspase-3信号通路作为结直肠癌治疗的新靶点提供科学依据。关键词：结直肠癌；TLR4；凋亡；p38II中山大学硕士学位论文何卉欣，TLR4诱导的凋亡在结直肠癌中的作用英文摘要TLR4inducesapoptosisofcolorectalcancerthoughp38/caspase-3

7、pathwayMasterCandidate:HuixinHeMajor:InternalmedicineSupervisor:Prof.XiuqingWeiABSTRACTColorectalcarcinoma(CRC)isthethirdmostcommoncancerintheworld,aswellasthefourthleadingcauseofcancermortality.Morethan1millionpeoplegetCRCeveryyearglobally,withthetotaldeathover700,

8、000.Theincidenceandthemortalityshowagrowingtendency.AlthoughmuchprogresshasbeenmadeinthefundamentalresearchandclinicalstudiesonCRCinrecent