微波辅助萃取－分光光度法测定细梗胡枝子叶中总黄酮的含量

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1、微波辅助萃取－分光光度法测定细梗胡枝子叶中总黄酮的含量张帆，齐小花，邹明强，解瑞丽，李锦丰，杨屹，张宏桂【摘要】　　目的采用微波辅助萃取法提取，以分光光度法测定细梗胡枝子叶中的总黄酮含量。方法单因素法优化微波提取条件为：使用75%乙醇，在液固比70ml/g下，加热至75℃后持续辐射15min。结果与传统的乙醇浸提法和超声法相比，微波法具有操作简便，经济可靠，重现性好等特点。结论微波法适合推广应用于各类中草药中总黄酮含量测定的样品前处理。【关键词】微波辅助萃取分光光度法细梗胡枝子总黄酮　　Abstract：ObjectiveToextract

2、totalflavonesfromLespedezavirgata(Thunb.)DC.bymicroineitscontentbyabsorptionspectroscopy.MethodsTheextractedconditionsofflavonesizedas70ml/gof75%ethanoltoleavesperatureof75℃for15min.Resultsparedocerationandultrasonic-assistedextraction,micropleandaccurateinationofflavonein

3、manykindsoftraditionalChinesemedicines.　　Keyicrol容量瓶中，取少量样品溶液，依次加入若干毫升的NaNO2溶液，Al(NO3)3溶液和NaOH溶液，然后用乙醇溶液定容至10ml，于室温下放置10min，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在选定波长下测定其吸光度〔15，16〕。根据标准曲线求得总黄酮的提取率，其计算公式为：提取率(mg/g)＝X×V/m，其中X是从标准曲线上查得的浓度值，V为萃取液体积，m为细梗胡枝子叶的质量。　　3结果　　3.1测定波长的选择取适量总黄酮萃取液进行显色反应，用分光

4、光度计对其红色产物在400～700nm之间扫描，在510nm处有最大吸收，所以确定510nm为测定波长。　　3.2显色反应时间的确定准确吸取一定量样品溶液，按照实验方法在0～60min范围内，每隔5min测定其吸光度考察反应体系的稳定性。由实验结果可以看出，黄酮显色产物在前30min内吸光度基本不变，但在30min后，吸光度开始略有下降，因此其吸光度应控制在定容后前30min内测定。　　3.3标准曲线的建立精确称取芦丁标准品10mg，用75%乙醇水溶液定容至100ml容量瓶中，配好冷藏放置于冰箱中。分别取0.0，0.5，1.0，1.5，2.

5、0，2.5ml标准液于10ml容量瓶中，分别加入一定量的75%乙醇水溶液稀释成5.0ml。加入5%NaNO2溶液0.3ml，摇匀，放置6min；再加入10%的Al(NO3)3溶液0.3ml，摇匀，再放置6min；加4%的NaOH溶液2.0ml，用水稀释至刻度，放置10min，在分光光度计上，以试剂空白为参比于510nm处测其吸光度，得到回归方程为：A=11.7C-0.0047(r=0.9997)，式中A为吸光度，C为溶液中芦丁的浓度(g/ml)。该方程在所测范围内(5～25g/ml)线性关系良好。　　3.4微波辅助萃取法的单因素实验　　3.

6、4.1乙醇浓度对黄酮提取率的影响　　本文用乙醇溶液作为提取体系，考察了乙醇浓度对微波萃取细梗胡枝子叶中黄酮类物质的影响，结果见图1。由图1可见，总黄酮提取率随乙醇浓度的增大先呈上升趋势，在乙醇浓度为75%时达到最大，之后乙醇浓度再增大时，提取率呈下降趋势，因此考虑选75%乙醇作提取剂为宜。　　3.4.2液固比对黄酮提取率的影响　　在其他条件相同下，不同溶剂用量对黄酮提取率的关系如图2所示。从图2可知，提取率随着液固比的增大而呈上升趋势，但增大到70ml/g后就趋于下降，之后实验中选择液固比为70ml/g。　　3.4.3溶液温度对黄酮提取率的

7、影响　　在其他条件相同下，得黄酮提取率与溶液温度的关系，见图3。由图3可知，75℃以前总黄酮提取率随功率增加呈现上升，75℃后开始下降。因此实验中溶液温度最好控制在75℃。　　3.4.4微波辅助提取时间对黄酮提取率的影响　　在其他条件相同下，考察了黄酮提取率与微波辅助提取时间的关系，见图4。由图4可知，提取率随微波辐射时间的增加而呈现先增加后下降的趋势。从时间效益考虑，微波时间应控制在15min。　　3.5最佳条件下的重复性和回收率实验　　3.5.1重复性实验　　取同一批细梗胡枝子叶样品5份，在最佳条件下进行萃取，分别测定各自的总黄酮含量，

8、结果表明其相对标准偏差为1.79%。　　3.5.2加样回收率实验　　准确称取一定量样品9份，加入不同量的芦丁对照品溶液在相同微波条件下进行萃取，萃取物按实验方法进行显色，测定吸光