雷公藤红素对人乳腺癌细胞系mcf-7的作用

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1、雷公藤红素对人乳腺癌细胞系MCF-7的作用郑鹏飞(辽宁省北票市职业病防治医院122100)【摘要】目的研究雷公藤红素对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长周期的影响及其分子生物学机制。方法以不同浓度的雷公藤红素处理MCF-7细胞不同时间，采用四甲基偶氮唑盐分析法检测各组MCF-7细胞增殖情况，流式细胞仪检测药物作用前后对细胞周期的变化，Westernblot检测药物作用前后生存蛋白及P21蛋白表达的变化。结果MTT法检测结果显示雷公藤红素对MCF-7细胞增殖的抑制呈浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05).目.存在最大抑制浓度lμmol/L;

2、流式细胞仪检测发现随着魟鱼骨素作用时间的延长G1期细胞亩分比明显增加(P<0.05)而G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05)且细胞凋亡率随药物作用时间的延长明显升高(P<0.05)；Westernblot检测结果显示随着药物作用时间延长，MCF-7细胞中的生存蛋白表达降低，p21蛋白表达逐渐增高(P<0.05)。结论雷公藤红素抑制MCF-7细胞增殖，阻滞细胞停留在G1期，其机制可能与调控此两种蛋白表达有关，雷公藤红素可能成为未来治疗乳腺癌药物之一。【关键词】乳腺癌雷公藤红素MCF-7细胞系细胞增殖生存蛋白【中图分类号】R

3、73-3【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2013)43-0019-02木实验室以经雷公藤红素处理过的MCF-7人乳腺癌细胞为模型进行体外培养，研究有效的药物作用浓度和时间，分析其对细胞周期的影响，观察其对生存蛋白基因及p21表达的影响，研究它的抗肿瘤作用及抑癌机制。1资料与方法一、一般资料从雷公藤中提取的活性成分之一雷公藤红素(celastrol)，是一种醌三萜，经过纯化的雷公藤红素(纯度>99%)购自广州来普达生物技术有限公司，以DMSO（Sigma公司）溶解并制成lmmol/L（以下简称mM）浓度的工作液保存于-20°C冰

4、箱。人乳腺癌细胞株MCF-7（上海细胞库）,RPMI-1640、Trypsin（Gibco公司）,FBS胎牛血清（四季青公司），MTT、DMSO、AnnexinV-FITC（Sigma公司）、生存蛋白及p21鼠抗人单克隆抗体、碱性磷酸酶酶标记的二抗（美国Sigma公司）。二、方法1.细胞培养MCF-7培养于含10%的新鲜胎牛血清及100U/ml青-链霉素的RPMI-1640培养液中，置于5%CO2培养箱，恒温37°C培养◊每2〜3d换液1次,4〜7d传一代，使用胰蛋白酶消化传代。2.MTT比色法选用处于对数生长期的MCF-7细胞，用酶标仪测定其在4

5、90nm波长处的吸光度值。计算存活率:存活率=加药组吸光度值/对照组吸光度值×100%3.流式细胞术（FCM）常规培养MCF-7细胞，流式细胞仪分析细胞凋亡率。4.Westernblot分析。三、统计学处理应用SPSS16.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差表示，采用方差分析，组间比较采用q检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果一、MTT比色法检测雷公藤红素对MCF-7细胞增殖的作用，雷公藤红素对MCF-7细胞增殖抑制率并不是随着浓度的增大和时间的延长无限增强，艽存在最大抑制浓度C=1.0μmol

6、/I和最佳作用时间T=48h。图1雷公藤红素在不同条件下对MCF-7细胞增殖抑制率变化曲线二、雷公藤红素对MCF-7细胞周期的影响，流式细胞仪检测结果表明，随着雷公藤红素作用吋间（Oh、24h、48h）的延长，其MCF-7细胞G1期细胞百分率增加，G2/M期细胞百分率明显减少，如图2所示，与空白对照组相比雷公藤红素作用组MCF-7细胞更多的停留在G1期，从图3可以看出随着雷公藤红素作用吋间的延长，MCF-7细胞凋亡率也逐渐增高，24h及48h处理组与空白对照组比较差异具有统计学意义（R&

7、t;0.05）o图2流式细胞仪检测不同组别RCE对MCF-7

8、细胞周期的影响A:空白对照组（G1期细胞为41.21%,S期细胞为9.01%,G2期细胞为49.78%）;B:24h处理组（G1期细胞为45.72%,S期细胞为15.46%,G2期细胞为38.82%）;C:48h处理组（G1期细胞为59.65%,S期细胞为20.34%,G2期细胞为20.01%）图3流式细胞仪检测不同组别魟鱼骨素诱导MCF-7细胞凋亡情况Data.001:空白对照组（凋亡细胞为3.03%）；Data.002:24h处理组（凋亡细胞为9.65%）;Data.003:48h处理组（凋亡细胞为16.98%）三、Westernblot分析结

9、果，雷公藤红素对生存蛋白及p21蛋白表达的影响，如图4所示，与对照组比较雷公藤红素处理组生存蛋白表达明显减少，雷公藤红素作