总糖含量测定

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1、实验二总糖含量的测定一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620nm处有最大吸收，在150µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度

2、计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100ml浓H2SO4中。当日配制使用。3.材料：淀粉四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡萄糖标准液（ml）00.10.20.30.40.60.8蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（µg）0102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一

3、起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l02min取出，用冰浴冷却至室温，在620nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。2.植物样品中总糖的提取：精确称取0.5g，置于50ml三角瓶中，加水15m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml3.测定吸取1ml已稀释的提取液于试管中，加入4.Oml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲

4、线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。五、结果处理C×V总×D样品含糖量（%）=─────────────×100W×V测×106其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），V总——提取液总体积（ml），V测——测定时取用体积（ml），D——稀释倍数，W——样品重量（g），106——样品重量单位由g换算成µg的倍数六、注意事项：该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反

5、应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免

6、此种误差。七、思考题：1.在从山芋粉中提取总糖时，加入盐酸的目的是什么？2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。2