dmt1腺病毒表达载体构建和功能的研究

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1、缩略词表ADDM陌1Alzheimer'sdiseasedivalentmetaltransporter1阿尔茨海默病二价金属离子转运蛋白1。MT-+IREdivalentmct出咖黜“withIREfom言拿麓黼二价金属离子转运蛋DMTl-IREdivalentmetaltransporter1withoutIREform白1(不含铁调节元件)职ENramp2MDAOH·PBSPDSNPCRM1TGSH-pxSODironresponsiveelement铁反应元件naturalresistance—

2、associatedmacrophage具天然抗性的巨噬细protein2胞蛋白2malondialdehyde丙二醛hydroxylfreeradicals羟自由基phosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液Parkinson'sdiseasesubstantianigra帕金森病黑质polymerasechainreaction多聚酶联反应3-[4,5-DimcIhyⅢazol-2-yl】-2,5-diphenyltc卜四氮唑盐razoliumbromideglutathioneper

3、oxidasesupcmxidedismutasem谷胱甘肽过氧化物酶超氧化物歧化酶缩略词表ICP．MSGFPmonoamincoxidaseBtransferrinreceptor单胺氧化酶B转铁蛋白转铁蛋白受体-一yl-41phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyride}篆篱≯’2’neurodegenerativedisease神经退行性病astrogliareversctranscriptiondopamine星形胶质细胞反转录多巴胺iductivelycoupledplasma

4、-吣咖m唧笋胎躺徘顿IV绿色荧光蛋白m，0n；眦H讯舯融触盯队学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果．文中依法引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果．论舴者獬：王啬魄冲，月g日学位论文知识产权权属声明本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属学校．学校享有以任何方式发表，复制、公开阅览、

5、借阅以及申请专利等权利。本人高校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为青岛大学．本学位论文属于：论文作者签名：导师签名：(本声明的年解密后适用于本声明．1∞任何个人不得擅自使用)中文摘要DMTl腺病毒表达载体的构建和功能研究二价金属离子转运蛋白(divalentmetaltransport1，DMTI)，曾被称为具天然抗性的巨噬细胞蛋白2(natureresistance．associatedmacrophageprotein2，Nramp2)，是哺乳类的跨膜铁转运蛋白

6、。DMTl的功能一是介导小肠的铁吸收；二是介导内吞小体的铁移位。其mRNA存在两种形式，即“+IRE”和“．IRE”型，“+IRE”的3’非翻译区含有与转铁蛋白受体(tansferrinreceptor，TfR)mRNA的37非翻译区相似的铁调节元件(ironregulatoryelement，IRE)，“．IRE”型则不包含有IRE结构。DMTl由12个跨膜区组成，第四跨膜区是其重要的功能区，如发生突变，将会严重干扰DMTl的摄铁功能。研究发现DMTl在脑内广泛表达，其在脑内某些部位表达异常可改变脑铁

7、代谢并与帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)等神经退行性疾病(neurodegenerativedisease，NDs)的铁聚积有关。本研究构建DMTl第四功能区的腺病毒表达载体并感染C6胶质瘤细胞，研究其在DMTl摄铁中的作用：用重组腺病毒vAd．DMTI+IRE和vAd-DMTl-Ⅱm感染C6胶质瘤细胞，RT-PCR和WesternBlotting检测目的基因在c6胶质瘤细胞中的表达；感染重组腺病毒vAd．DMTI+IRE和vAd．DMTl．IRE的C6胶质瘤细胞铁孵育后，用电感偶

8、合等离子体-质谱(inductivelycoupledplasma-massspectrometry，ICP—MS)测定细胞内铁含量；MTF比色法、DNA片断化分析观察铁孵育对感染重组腺病毒vAd．DMTI+IRE和vAd-DMTI．IRE的C6胶质瘤细胞活性和凋亡的影响：测定感染重组腺病毒vAd-DMTI+IRE和vAd-DMTl．IRE的05胶质瘤细胞铁孵育后，细胞内羟自由基(hydroxylfreeradicals，OH·)和丙二醛(