微波消解法在蛋白质含量测定中的应用

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1、微波消解法在蛋白质含量测定中的应用全德甫孙华杰白江涛林俊香（深圳市宝安区观澜预防保健所广东深圳518110）【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）24-0018-02【摘要】目的探讨微波消解法在食品中蛋白质含量测定中的应用的可行性。方法用微波消解法代替凯氐定氮法中的消化方式，消化好的试样以定氮法测定。结果改进法与经典方法比较，测定结果基木一致，经t检验无显著性差异（t=0.4262,P〉0.05），方法精密度：RSD<3%（n=6），平均回收率=98.2%。结论该法操作

2、简便，分析速度快，空气污染小，试剂用量少，可用于食品中蛋白质的测定。【关键词】微波消解法食品蛋白质含量测定凯氏定氮法是测定食品中蛋白质含量的法定方法［1］,测定结果稳定、准确，但样品的消化费事费时，试剂消耗量大，且消化时排放的SO2直接危害分析人员身体健康。微波消解法具有操作简便，消化速度快，试剂用量少，空气污染小等优势。实验证明，用微波消解法代替凯氏定氮法中的消化方式，测定结果与法定方法无显著性差异，适用于大批量蛋白质含量的测定。1材料及方法1.1仪器及试剂1.1.1仪器XT-9900型智能微波消解仪（上海新拓微波

3、溶样测试技术有限公司出品）;AUW220D电子天平；定氮蒸馏装置。1.1.2试剂六次甲基四胺（标准品）；C（HCI）=0.0100mol/L的盐酸标准滴定溶液；其余同国家标准［1］。1.2实验方法1.2.1样品消解称取0.1〜0.5g混匀固体样品或1〜5mL液体样品于溶样杯中，加5〜8mL硫酸，稍摇匀后加1〜2mL过氧化氢，按表1进行样品消解，消解后样液应为清澈的溶液，放冷后，定容至25〜lOOmL，混匀备用。取与处理样品相同的硫酸、过氧化氢按同一方法做试剂空白实验。表1样品消解程序同吋使用凯氏法[1】进行蛋白质消解

4、，进行比较实验；取乳及乳制品、保健品等5份样品，分别称取6份进行蛋白质消解，进行精密度试验；另用标准品六次甲基四胺作准确度试验。1.2.2定氮测定按国家标准[1】中(GB/T5009.5-2003)食品中蛋白质的测定方法(4.3)微量定氮法进行操作。2结果2.1不同消解方法蛋白质测定结果的比较：对保健品、乳及乳制品等15份样品，用凯氏烧瓶和微波消解仪消化样品，分别测定蛋白质含量，结果见表2。表2两种消解方法蛋白质测定结果比较两种方法消化样品，蛋白质含量测得结果经统计学处理表明无显著差异。2.2方法精密度试验结果见表3

5、。表3方法精密度试验结果(n=6)2.3方法准确度试验取3份样品，分别加入一定量的六次甲基四胺，按上述方法测定，该基准物的理论含氮量为39.6%[2],结果见表4。表4冋收率试验结果3讨论3.1蛋白质测定中消化方法改为微波消解法，由于样品与试剂的反应是在密闭的容器内进行的，所以对环境的污染和对分析人员的毒害大大减小；用H2SO4-H2O2混合液为消化试剂，试剂用量少，消化速度快且消化彻底；仪器在设定好所需的压力值、微波加热时间和微波功率的条件下，即可自动完成全部操作，操作方便，减轻了分析人员的劳动强度，提高了工作效率

6、。3.2可视样品蛋白质含量高低，适当增减取样量，如遇在常温下需要长时间起反应的样品，或样品的称量增加，可将准备好的样品放置过夜，或在电热板上低温稍加热进行预处理，并不断摇动溶样杯，待反应缓和后再进行微波消解。过氧化氢可缓慢趁热加入，并不断摇动溶样杯，效果会更好，且大大缩短消化吋间。3.3干的样品放入溶样杯后，需先用少量去离子水湿润，溶样杯内溶液体积保持在5〜15mL，液面太低压力上升缓慢，太高容易造成压力过冲，超压泄气。消解程序中的第一档，功率可调至60%〜80%,第二、三档再调至100%,防止压力上冲，造成危险。实

7、验结果表明，改进法与经典方法比较，测定结果基本一致，经t检验无显著性差异(t=0.4262,P>0.05)，方法精密度:RSD<3%(n=6)，平均冋收率=98.2%,且简便易行，适用于大批量蛋白质含量的测定。参考文献[1]GB/T5009.5-2003食品中蛋白质的测定.[2】单季先，陈悦.食品中蛋白质含量测定方法的探讨.中国卫生检验杂志,2005,15(4),453.