钙离子在c型钠尿肽抑制乙酰胆碱增强胃窦环行平滑肌收缩效应中的作用

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1、钙离子在C型钠尿肽抑制乙酰胆碱增强胃窦环行平滑肌收缩效应中的作用作者：邢德刚张燕梁艳玲杨红【摘要】目的探讨细胞内外钙离子在C型钠尿肽（P）对乙酰胆碱（Ach）引起的大鼠离体胃窦环行平滑肌收缩效应中的作用。方法利用浴槽孵育离体大鼠胃窦环行肌肌条，用离体平滑肌张力记录装置记录平滑肌肌条收缩活动，观察钙离子对Ach引起的大鼠离体胃窦环行平滑肌收缩效应的影响。结果P对Ach引起的胃平滑肌自发性收缩增强效应有明显的抑制作用，在用无钙灌流液灌流后，P仍能抑制Ach引起的收缩效应。而用胞内钙离子释放抑制剂(TMB8)后，P不能抑制Ach引起的收缩效应。结论P抑制Ach引起的胃平滑肌自发

2、性收缩增强效应与胞内钙释放有关。【关键词】钙离子；C型钠尿肽；乙酰胆碱；胃窦环行平滑肌　近年研究发现，钠尿肽（NP）3种受体NPRA、NPRB和NPRC在胃窦的黏膜和肌肉组织中都存在〔1，2〕，对胃肠吸收、分泌和肠动力等方面均有调节作用。众所周知，调节胃肠运动兴奋最主要的是胆碱能系统，那么NP在调节胃肠运动与胆碱能系统之间有怎样的关系尚未见报道。既往研究表明，C型钠尿肽(P)对胃平滑肌细胞的L型钙电流、自发瞬间外向钾电流、非选择性阳离子电流(Icch)均有一定作用〔3～5〕，其中Icch与胆碱能系统调节胃肠作用有着密切的关系，提示NP能影响胆碱能系统调节胃肠作用。笔

3、者近期的研究发现，用胆碱能系统激动剂CarbAchol能明显增强胃平滑肌自发性收缩活动，这种兴奋作用可被P抑制，证明P与胆碱能系统在调节胃平滑肌自发性收缩活动中起相互拮抗作用，其作用机制与P改变胞内cGMP系统，进而影响Icch有关〔6〕。为进一步探讨P对胃肠运动的调节与胆碱能系统相互作用的机制，本实验观察细胞内外钙离子在P影响胆碱能系统效应中的作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物　　选用体重200～230g的B8)购自Sigma公司。重碳酸盐缓冲液成分(mmol/L)：NaCl116、KCl5.4、NaHCO324、NaH2PO31、MgC121、CaC122、葡萄

4、糖5.6，用HCl将溶液调至pH7.35。　　1.3制备胃窦环行肌条　　实验时猛击大鼠头部致昏，迅速取出其全胃。沿胃小弯打开胃，在Krebs液中漂洗干净。以黏膜面朝上将胃固定在蜡盘中，用小剪刀轻轻去除其黏膜层。平行于胃窦环形肌纤维走向切取肌条(10mm×1.5mm)，将其固定于恒温灌流槽内(37℃)，用碳酸氢钠缓冲液连续灌流并通混合氧,利用生物信号处理系统记录胃窦平滑肌自发性收缩活动。　　1.4Ach与P相互作用的测定　　用累积法描记胃窦肌条对Ach(1×10-8～1×10-3mol/L)的量效曲线及给予P(10-7mol/L)10μl再重复5HT量效曲线。　　1.5胞内

5、钙离子与Ach、P相互作用的关系测定　　肌条处于自然长度(不过度牵拉或松弛)，在重碳酸盐缓冲液孵育60min左右，出现稳定的自发性收缩；以此为对照，将重碳酸盐缓冲液更换成无钙灌流液灌流，收缩稳定后，加入Ach10-5mol/L，此时Ach所致的收缩是依赖细胞内Ca2＋的收缩，待收缩稳定10min后，加入P30μmol/L。　　1.6胞外钙离子与Ach、P相互作用的关系测定　　标本在正常含钙灌流液中自发性收缩稳定后，加入胞内钙离子释放抑制剂TMB810μl(10-5mol/L)作用10min后，加入Ach10-5mol/L。此时Ach所致的收缩是依赖细胞外Ca2＋的收缩，收

6、缩稳定后加入P30μmol/L。　　1.7统计学方法　　所有统计数据用x±s来表示,结果采用同体对照的t检验和组间对照的t检验。肌肉收缩幅度百分比=实验组收缩幅度/对照组收缩幅度×100%。　　2结果　　2.1P呈非竞争性拮抗Ach引起的胃窦肌条收缩量效曲线　　见图1。P使Ach量效曲线呈非平行右移，最大效应降低，抑制作用随剂量加大而增强，提示P呈非竞争性拮抗Ach引起的胃窦肌条收缩，用电脑作数据处理，得直线回归方程及相关系数r>0.93(P<0.01)，测得PD′2为4.88±0.14。　　2.2细胞内钙离子参与P对Ach的抑制作用　　在重碳酸盐缓冲液孵育60

7、min左右，出现稳定的自发性收缩；用无钙重碳酸盐缓冲液冲洗灌流后，收缩幅度明显降低，下降到（13±5）%；稳定10min后，加入Ach(10-5mol/L)，胃平滑肌收缩幅度明显提高，由（13±5）%增加到（93±8）%（Ｐ＜０.０１）；说明在细胞外无钙的条件下，Ａch仍可通过胞内钙释放引起胃平滑肌收缩。待收缩稳定10s后，加入P(10-7mol/L)10μl，Ａch引起的收缩增强效应明显被抑制，收缩幅度降低到（21±4）%（Ｐ＜０.０１），表明细胞内钙离子释放参与了P对Ach引起的收缩增强效应的抑制作用。　　2.