器官移植受者微量cmv dna与il

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1、器官移植受者微量CMVDNA与IL作者：傅晶郑建建潘晓东杨亦荣陈必成郑少玲【摘要】目的研究白介素-10（IL-10）基因G1082A和C819T单核苷酸多态性（SNP）与移植术后外周血微量巨细胞病毒（CMV）DNA的关系。方法采集176例移植术后受者，429例次的外周血。通过巢式聚合酶链反应（nPCR）技术检测微量CMVDNA。通过序列特异性聚合酶链反应（SSP-PCR）技术检测IL-10基因G1082A与C819T的变异情况。分析IL-10各基因型在微量CMVDNA受者中的分布频率，并对阳性组与阴性组进行比较。结果研究人群中IL-10G1082A和C819T基因型分布符合Hard

2、y-VDNA阳性组IL-10G1082A和C819T等位基因频率分别为G=3.75%、A=96.25%和C=32.50%、T=67.50%；CMVDNA阴性组分别为G=5.51%、A=94.49%和C=36.03%、T=63.97%。CMVDNA阳性组两SNP基因型及等位基因分布与其在CMVDNA阴性组中的分布差异无显著性（P>0.05）。结论目前尚不能认为IL-10基因G1082A与C819T单核苷酸多态性与移植受者微量CMVDNA阳性有相关性。【关键词】白介素-10单核苷酸多态性移植巨细胞病毒　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetherel

3、ationshipbetplesof176patientserasechainreaction(nPCR).TheIL-10G1082AandC819T'sSNPinedusingsequencespecificprimerspolymerasechainreaction(SSP-PCR).ResultsInthe40CMVDNA-positivesamples,theG1082Aallelefrequenciesples,theG1082Aallelefrequenciesilarbetorphism(SNP)transplantationCytomegalovirus(CMV)

4、　　IL-10具有抗炎和免疫调节作用，亦可通过调节其他细胞因子而发挥作用。其中免疫抑制效应是IL-10的主要生物学作用之一。目前发现位于IL-10基因启动子区域中G-1082A、C-819T、C-592A基因的单核苷酸多态性（SNP）与移植免疫状态关系密切。本研究根据CMV的潜伏感染特点，尝试以外周血微量CMVDNA作为评价免疫抑制状态的靶分子，探讨IL-10基因G1082A与C819T单核苷酸多态性与温州地区5年来器官移植受者微量CMVDNA阳性的关系。现报告如下。　　1资料与方法　　1.1免疫抑制药物浓度检测受者的免疫抑制方案均以他克莫司（FK506）为主。服药前，抽取静脉血测

5、全血FK506浓度谷值。FK506浓度采用微粒子酶免疫分析技术测定。　　1.2方法连续收集2007年6至9月肝、肾移植术后来本院随访者FK506浓度检测血标本，共176例受者，429例次。被检受者术后已随访6～30个月，术前CMVpp65抗原检测均阴性。男130例，女46例；平均年龄(44.80±11.21)岁。根据CMVDNA检测将其分为阳性组和阴性组。其中107例受者多次检测，当出现CMVDNA阳性时即将其列为阳性组。阳性组中，对于多次检测的受者，FK506浓度取CMVDNA阳性时所对应浓度的平均值；阴性组则为各浓度的平均值。　　1.3DNA提取取FK506浓度检测血标本全血3

6、00μl，破红细胞后，裂解白细胞，沉淀蛋白质，然后予异丙醇析出DNA，最后加入100μlDNA水合液，75℃水浴10min，-20℃保存备用。　　1.4核酸扩增(1）巢式聚合酶链反应（nPCR）技术检测微量CMVDNA：根据CMV病毒基因组设计引物，第1次PCR扩增引物分别为P15'TCTAAGACATAGCAGCACAGCACC3'、P25'TGAAAAAATATACCCAGACGGAAG3'；第2次PCR扩增引物分别为P35'AGCACCCGACAGAACTCACT3'、P45'TATGGCTTATGCCCAGAAAA3'。取1.5μlDNA用于15μl的PCR体系，其中包括：

7、15mMTris-HCl(pH8.3)、75mMKCl、3mMMgCl2、1.5mMdNTP、0.675UTaqpolymerase、0.15μM引物、5％甘油。第1次PCR反应条件为经过94℃预变性2min后，94℃变性20s，58℃退火60s，72℃延伸60s，共30个循环，最后72℃延伸2min。完成后取1.5μlPCR产物用于第2次扩增，经过94℃预变性2min后，进行25个循环，94℃变性10s,55℃退火30s，72℃延伸30s，最后进行72℃延伸2min