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时间:2018-07-07
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1、植受者免疫抑制治疗影响外周血微量CMVDNA的【摘要】目的:探讨移植术后免疫抑制治疗个体,外周血中巨细胞病毒脱氧核糖核酸(CMVDNA)的变化规律,并评价其潜在的临床应用价值。方法:通过对免疫抑制治疗个体、健康个体外周血微量CMVDNA的检测,分析CMVDNA与免疫抑制剂浓度的关系;同时对30例患者的连续标本进行配对实验,说明过度免疫抑制可导致微量CMVDNA的出现。结果:健康个体组、环孢素组、FK506组中微量CMVDNA阳性率分别达到0%、42.24%和11.8%,阳性组平均免疫抑制药物浓度明显高于阴性组(P<0.05
2、),高药物浓度组阳性率明显高于低浓度组(P<0.05)。配对实验提供了相同的结果。结论:免疫抑制药物浓度影响微量CMVDNA动态的变化,部分反映了个体免疫抑制状态,对指导临床用药有一定的价值。【关键词】移植免疫抑制巨细胞病毒Abstract:Objective:Toinvestigateapprovedimmunosupressionconcentrationononuclearcellsoftheposttransplantion.Methods:294casesofpatients(410casesofbloodsam
3、ple)ofpost-transplantationand96casessamplesofhealthcheckuponths.ImmunosuppressionconcentrationandCMVDNAeasuredmunosuppressionconcentrationofpatientsplesplestest.Result:CMVDNAl,patientshadhighestCMVDNApositiverate55.71%(P<0.05).ThemeanCSAandFK506concentrationsofCMV
4、DNApositivegroupplestestgetthemoresignificantresult(P<0.05).Conclusion:NestedPCRdetectedCMVDNAmaybeanassayforindirectlyevaluatedimmunosupressionstateoftheposttransplantation.Keymunosuppression;CMV排斥或感染一直是移植受者服用免疫抑制药物必须面临的两大问题。而解决此矛盾的首要措施即是寻找一个能综合反映个体免疫状态的指标,建立评价个体
5、免疫抑制状态的有效技术。国人抗CMVIgG阳性率接近100%,世界范围内亦有60%~100%的感染率。根据CMV的潜伏感染特点,尝试以外周血微量CMVDNA作为评价免疫抑制状态的指标,采用敏感的巢式聚合酶链反应(nPCR)技术检测移植受者外周血中微量CMVDNA,并探讨其与免疫抑制程度的关系。1材料和方法1.1免疫抑制药物浓度检测受者的免疫抑制方案均以环孢素(CSA)或他克莫司(FK506)为主。服药前,抽取静脉血测全血CSA或FK506浓度谷值。CSA、FK506浓度分别采用酶免疫发光技术(仪器AbbottTDx)和微粒子酶免
6、疫分析技术(仪器AbbottIMx)测定。1.2标本及分组采用酶联免疫吸附试验检测受者及96例健康体检人员的血浆CMVIgG抗体,并检测CMVDNA。连续收集2006年10月至2006年12月移植随访者药物浓度检测血标本,共294例受者,410例次。移植随访者均为移植术后3个月以上。其中服用CSA为173人,服用FK506为121人;男180例,女114例,平均年龄(44.39±11.97)岁。根据免疫药物浓度(CSA以200ng/ml或120ng/ml为界线;而FK506浓度以5ng/ml为界线)将其分组。另根据CMVDNA检
7、测结果将其分为阳性组和阴性组。其中46例多次检测,当同一个体先后出现CMVDNA阳性和阴性时对其药物浓度进行配对比较(此两标本为连续收集的标本)。移植患者术前行常规CMVDNA检查,结果均提示阴性。移植患者术后第3周开始予更昔络维针250mg/d预防病毒感染治疗,疗程1周。1.3DNA提取收集环孢素浓度测定标本,取300μl全血加入0.98%的NH4Cl1ml破红细胞膜10min,离心后取白细胞加入300μl细胞裂解液,充分混匀后放置10min;加入蛋白质沉淀液150μl充分混匀,离心5min(12000r/min);取上清液加
8、入异丙醇300μl沉淀蛋白质;以75%乙醇洗3次,待乙醇蒸发后加入溶解液100μl,-20℃保存。1.4核酸扩增①nPCR:根据CMV病毒基因组设计引物,第一次PCR扩增引物分别为P15'-TCTAAGACATAGCAGCACAGCACC-3'和P25'-TGA
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