移植受者免疫抑制治疗影响外周血微量cmv dna

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1、移植受者免疫抑制治疗影响外周血微量CMVDNA【摘要】目的:探讨移植术后免疫抑制治疗个体,外周血中巨细胞病毒脱氧核糖核酸（CMVDNA）的变化规律，并评价其潜在的临床应用价值。方法:通过对免疫抑制治疗个体、健康个体外周血微量CMVDNA的检测，分析CMVDNA与免疫抑制剂浓度的关系；同时对30例患者的连续标本进行配对实验，说明过度免疫抑制可导致微量CMVDNA的出现。结果:健康个体组、环孢素组、FK506组中微量CMVDNA阳性率分别达到0%、42.24%和11.8%，阳性组平均免疫抑制药物浓度明显高于阴性组（P<

2、;0.05），高药物浓度组阳性率明显高于低浓度组（P<0.05）。配对实验提供了相同的结果。结论:免疫抑制药物浓度影响微量CMVDNA动态的变化，部分反映了个体免疫抑制状态，对指导临床用药有一定的价值。【关键词】移植免疫抑制巨细胞病毒Abstract:Objective:Toinvestigateapprovedimmunosupressionconcentrationononuclearcellsoftheposttransplantion.Methods:294casesofpatients(410cases

3、ofbloodsample)ofpost-transplantationand96casessamplesofhealthcheckuponths.ImmunosuppressionconcentrationandCMVDNAeasuredmunosuppressionconcentrationofpatientsplesplestest.Result:CMVDNAl,patientshadhighestCMVDNApositiverate55.71%(P<0.05）.ThemeanCSAandFK506conc

4、entrationsofCMVDNApositivegroupplestestgetthemoresignificantresult（P<0.05）.Conclusion:NestedPCRdetectedCMVDNAmaybeanassayforindirectlyevaluatedimmunosupressionstateoftheposttransplantation.Keymunosuppression；CMV排斥或感染一直是移植受者服用免疫抑制药物必须面临的两大问题。而解决此矛盾的首要措施即是寻找一个能

5、综合反映个体免疫状态的指标，建立评价个体免疫抑制状态的有效技术。国人抗CMVIgG阳性率接近100%，世界范围内亦有60%～100%的感染率。根据CMV的潜伏感染特点，尝试以外周血微量CMVDNA作为评价免疫抑制状态的指标，采用敏感的巢式聚合酶链反应（nPCR）技术检测移植受者外周血中微量CMVDNA，并探讨其与免疫抑制程度的关系。1材料和方法1.1免疫抑制药物浓度检测受者的免疫抑制方案均以环孢素（CSA）或他克莫司（FK506）为主。服药前，抽取静脉血测全血CSA或FK506浓度谷值。CSA、FK506浓度分别采用酶

6、免疫发光技术（仪器AbbottTDx）和微粒子酶免疫分析技术（仪器AbbottIMx）测定。1.2标本及分组采用酶联免疫吸附试验检测受者及96例健康体检人员的血浆CMVIgG抗体，并检测CMVDNA。连续收集2006年10月至2006年12月移植随访者药物浓度检测血标本，共294例受者，410例次。移植随访者均为移植术后3个月以上。其中服用CSA为173人，服用FK506为121人；男180例，女114例，平均年龄（44.39±11.97）岁。根据免疫药物浓度（CSA以200ng/ml或120ng/ml为界线；而FK5

7、06浓度以5ng/ml为界线）将其分组。另根据CMVDNA检测结果将其分为阳性组和阴性组。其中46例多次检测，当同一个体先后出现CMVDNA阳性和阴性时对其药物浓度进行配对比较（此两标本为连续收集的标本）。移植患者术前行常规CMVDNA检查，结果均提示阴性。移植患者术后第3周开始予更昔络维针250mg/d预防病毒感染治疗，疗程1周。1.3DNA提取收集环孢素浓度测定标本，取300μl全血加入0.98%的NH4Cl1ml破红细胞膜10min，离心后取白细胞加入300μl细胞裂解液，充分混匀后放置10min；加入蛋白质沉淀

8、液150μl充分混匀，离心5min(12000r/min)；取上清液加入异丙醇300μl沉淀蛋白质；以75%乙醇洗3次，待乙醇蒸发后加入溶解液100μl，-20℃保存。1.4核酸扩增①nPCR:根据CMV病毒基因组设计引物,第一次PCR扩增引物分别为P15'-TCTAAGACATAGCAGCACAGCACC-3'和P25'-TGA