雷公藤内酯与csa联合抗大鼠异种角膜移植排斥

《雷公藤内酯与csa联合抗大鼠异种角膜移植排斥》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、雷公藤内酯与CsA联合抗大鼠异种角膜移植排斥【摘要】目的我们用大鼠异种穿透性角膜移植的动物模型，来研究雷公藤内酯与CsA联合抗移植排斥的效果。方法我们用豚鼠角膜对icrocytic水肿；4，大疱性角膜病变。（3）新生血管：0，无；1，周边新生血管；2，切口部新生血管；3，植片部新生血管；4，全角膜新生血管。Opton裂隙灯显微镜观察，每隔3天计分一次，动态观察30天。2.4免疫组化观察（1）角膜移植术后第6天、第10天和第15天各组各取1只鼠角膜移植眼球做冰冻切片及免疫组化，方法：①在冰冻切片机中切片。②切片置于0.03%H2O2甲醇中放

2、入真空箱内，在66.7kPa负压下持续10min。③自来水洗，0.01mol/LpH7.2PBS洗3次，共3min。④加入正常马血清，同②处理。⑤直接分别加入小鼠抗大鼠T淋巴细胞亚群aRTh/i(aRTc/s(OX-8)，MaRIa(OX-6)，MaRIL-2R(ART-18），和MaRI1640离心洗3次，调整淋巴细胞悬液浓度为1×105个/ml，取0.1ml涂片，吹干，用丙酮固定1min，PBS洗片。同（1）法作免疫组化。动态观察术前3天，术后3天、9天、15天、21天和30天。2.5统计学分析所有实验数据均用±s表示，用SPSS11

3、.0统计软件作Student-Nean-Keulstest(SNK)分析，两样本均数间进一步作Student’sT-test，分析，P＜0.05为差别有统计学意义。3结果3.1角膜移植术后的临床观察动态观察各治疗组间RV变化，随着时间的推移治疗组RV曲线上升趋势比对照组要缓慢，而CsA和雷公藤内酯联合用药组RV曲线上升的最为缓慢（图1）。以RV>7时为发生严重排斥反应的标准，观察对照组发生严重排斥反应的时间为(13.1±1.5)天，而各治疗组达到此RV时间明显长于对照组（P＜0.01），差别有统计学意义。CsA(10mg/kg)和雷

4、公藤内酯(100μg/kg)联合用药抗排斥作用要优于同等剂量的单独给药（P＜0.01），见表1。图1大鼠穿透性异种角膜移植临床观察表1不同处理组角膜植片发生严重排斥反应的时间(RV>7，±s)3.2角膜移植前后各治疗组外周血T细胞亚群的变化在角膜移植前3天，后15天两时间点比较各治疗组外周血T细胞亚群的变化时，发现CD4+细胞的百分数变化各组间差别无统计学意义，CD8+细胞的百分数变化各治疗组明显低于对照组，而联合用药组又明显低于CsA或雷公藤单独给药组。IL-2R+细胞百分数变化各治疗组也明显低于对照组，它们的差别均有统计学意义（

5、P＜0.05），见表2。表2角膜移植后各治疗组间外周血T细胞亚群变化（X1-X2）%的比较(±s)#Note:ThechangesofCD8+cell：2，3and4VS.1，*P＜0.05;4VS.2or3，**P＜0.05.ThechangeofIL-2R+cell2，3and4VS.1，#P＜0.05.3.3角膜移植后植片的免疫组化观察各治疗组术后15天植片中淋巴细胞浸润均明显少于对照组，其中联合用药组和CsA组又少于雷公藤内酯组，从浸润植片中T细胞亚群的比例来看，对照组CD4+:CD8+:IL-2R+:Ia+均在1.2:1:1:1

6、，而雷公藤内酯组则以CD4+和Ia+细胞浸润为主，联合用药组浸润淋巴细胞略少于CsA组类似于术后第8天时对照组的情况，植片中主要为少量的Ia+细胞（见图2）。Note:A.Normal，B.Control，C.Triptolide，D.CsA，E.Triptolidet+CsA.图2各治疗组术后15天植片中淋巴细胞浸润情况4讨论1979年，Coster等用CsA延长了同种角膜移植植片的存活期。这样CsA作为无骨髓毒性、有选择性地抑制Th细胞活化的免疫抑制剂，成为目前临床上最常用的抗排斥药物之一。许多器官移植的成功显然与其应用密不可分，但仍

7、存在疗效有限和因免疫功能的抑制易导致感染、肿瘤的发生，长期使用还会造成肝、肾和骨髓损害及代谢紊乱等［3］。近年来，已证明雷公藤具有免疫抑制作用，用于器官移植可降低慢排斥反应发生率。此外，其还有一定的抗菌、抗肿瘤作用，但其使用剂量过大时，也会出现严重的毒副作用如心、肝、肾和生殖等组织器官的损害［4，5］。我们选用雷公藤内酯和CsA联合用药基于CsA可抑制正常淋巴细胞中多种淋巴因子的mRNA转录但不抑制IL-2R合成和T细胞受体识别抗原，并对经细胞膜的信号转导无作用，而雷公藤主要是抑制Th细胞的增殖，同时抑制Th细胞产生IL-2而影响Tc细胞

8、分化增殖并明显抑制丝裂原或抗原刺激下的淋巴细胞表面IL-2R表达［6］。由此说明雷公藤和CsA在作用机制上可以互补。本实验在角膜移植术后注射15mg/kg体重组临床疗效明显，血中Th/i细胞变