硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用

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1、硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用.L.编辑。作者：袁红建，徐瑞容，丁润生，姜胜华，陆伟【摘要】为了研究硫化砷（As2S2）在体外对骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞增殖的影响，并探讨其可能的作用机制，采用MTT法、流式细胞术、RT-PCR等多参数检测不同浓度As2S2诱导MDS细胞的凋亡。结果表明：①低浓度（0-0.6mg/L）的硫化砷对MDS细胞无明显抑制作用；②相对高浓度的硫化砷（1.5-50mg/L）对低危组MDS以及高危组MDS的单个核细胞均有诱导凋亡作用，且呈时间浓度依赖关系；bcl-2mRNA在As2S2作用后表达明显下调，bcl-2/bax比例明显下降(P

2、<0.05)；③MDS病人存在骨髓造血细胞的过度凋亡。结论：MDS病人存在骨髓造血细胞的过度凋亡；低浓度的硫化砷对MDS细胞没有明显的增殖抑制作用，高浓度的硫化砷主要通过诱导凋亡使MDS细胞死亡。【关键词】骨髓单个核细胞　　ApoptosisofInVitroCulturedBMMNCfromMDSPatientsInducedbyArsenicSulfide　　AbstractTheaimofthisstudyMDSpatientsandtoexploreitspossiblecellularandmolecularmechanisms．TheapoptosisofMDScellsin

3、ducedbyAs2S2solutionofdifferentconcentrationsetry，andRT-PCR.Theresultsshog/L）hadnomarkedinhibitioneffectonproli-ferationofMDScells；(2)aftertreatmentg/LofAs2S2，bothloanner，theexpressionofbcl-2mRNAandtheratioofbcl-2/baxobviouslydecreasedafterAs2S2treatment(P<0.05);(3)BMMNCfromMDSpatientshadhigherap

4、optosisratiothanthatofBMMNCfromcontrol.ItisconcludedthatBMMNCexcessiveapoptosisexistsinMDSpatients;log/L）shog/L）inducesapoptosisofMDScells.　　Keyyelodysplasticsyndromes;arsenicsulfide;BMMNC;apoptosis;bcl-2;bax骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndromes，MDS)是一种造血干细胞异常克隆性与异质性疾病，其主要特征为病态造血和无效造血，部分患者易向白血病转化。MDS发病

5、率有逐年上升趋势［1］，但目前对其治疗仍无很好的方法。经研究发现，砷剂具有致癌、致畸、致突变的协同作用；作为微量元素，砷尚能促进造血、细胞生长和繁殖［2］。硫化砷（As2S2）是中药雄黄的主要成分，近年来，用雄黄治疗MDS取得了一定的疗效［3］，本研究以观察硫化砷（As2S2）在体外对MDS骨髓单个核细胞的作用，查明其可能的治疗机理，开发其应用领域。　　材料和方法　　病例选择　　MDS患者25例，按照FAB分型［4］，RA15例，RAS3例，RAEB5例，RAEB-t2例。男性16例，女性9例，中位数年龄45（19-80）岁，为初诊及复诊的患者，每例均经骨髓细胞形态学和骨髓病理等相关的实验室检

6、查确诊。以上病例来自南通大学附属医院血液科。　　标本采集和细胞分离　　自髂后上棘抽取5ml骨髓液，0.1%肝素抗凝，采集后2小时内用淋巴细胞分离液密度梯度离心分离骨髓单个核细胞，RPMI1640培养液洗3遍，制成细胞悬液，计数备用。　　试剂　　硫化砷（As2S2）购自美国Sigma公司，纯度99.99%，以0.2mol/LNaOH溶解，HCl中和滴定至pH7.35-7.45，制成0.1%的储存液，4℃保存。MTT购自美国Sigma公司，临用前以PBS配制成5mg/ml，抽虑除菌，保存在4℃条件下。RT-PCR试剂盒购自晶美公司，AnnexinVFITC试剂盒购于联科生物公司。　　MTT增殖抑制

7、实验　　硫化砷分成7种不同浓度（0.3、0.6、1.5、3.0、15、30、50）mg/L组，加上调零孔（没有细胞和药）和对照孔（不加药），共为9组，每组设5个复孔。分离的骨髓单个核细胞以每孔1000-10000个接种到96孔板，每孔体积200μl，培养液为含不同浓度的硫化砷的RPMI1640（含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素）；37℃，5%CO2条件下分别培养24、