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时间:2018-07-08
《硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用论文.freelg/L)的硫化砷对MDS细胞无明显抑制作用;②相对高浓度的硫化砷(1.5-50mg/L)对低危组MDS以及高危组MDS的单个核细胞均有诱导凋亡作用,且呈时间浓度依赖关系;bcl-2mRNA在As2S2作用后表达明显下调.freelMDSPatientsInducedbyArsenicSulfideAbstractTheaimofthisstudyMDSpatientsandtoexploreitspossiblecellularandmole
2、cularmechanisms.TheapoptosisofMDScellsinducedbyAs2S2solutionofdifferentconcentrationsetry,andRT-PCR.Theresultsshog/L)hadnomarkedinhibitioneffectonproli-ferationofMDScells;(2)aftertreatmentg/LofAs2S2,bothloanner,theexpressionofbcl-2mRNAandtheratioofbcl-2/baxo
3、bviouslydecreasedafterAs2S2treatment(P0.05);(3)BMMNCfromMDSpatientshadhigherapoptosisratiothanthatofBMMNCfromcontrol.ItisconcludedthatBMMNCexcessiveapoptosisexistsinMDSpatients;log/L)shog/L)inducesapoptosisofMDScells.Keyyelodysplasticsyndromes;arsenicsulfide
4、;BMMNC;apoptosis;bcl-2;bax骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndromes,MDS)是一种造血干细胞异常克隆性与异质性疾病,其主要特征为病态造血和无效造血,部分患者易向白血病转化。MDS发病率有逐年上升趋势[1],但目前对其治疗仍无很好的方法。经研究发现,砷剂具有致癌、致畸、致突变的协同作用;作为微量元素,砷尚能促进造血、细胞生长和繁殖[2]。硫化砷(As2S2)是中药雄黄的主要成分,近年来,用雄黄治疗MDS取得了一定的疗效[3],本研究以观察硫化砷(As2S2)在
5、体外对MDS骨髓单个核细胞的作用,查明其可能的治疗机理,开发其应用领域。材料和方法病例选择MDS患者25例,按照FAB分型[4],RA15例,RAS3例,RAEB5例,RAEB-t2例。男性16例,女性9例,中位数年龄45(19-80)岁,为初诊及复诊的患者,每例均经骨髓细胞形态学和骨髓病理等相关的实验室检查确诊。以上病例来自南通大学附属医院血液科。标本采集和细胞分离自髂后上棘抽取5ml骨髓液,0.1%肝素抗凝,采集后2小时内用淋巴细胞分离液密度梯度离心分离骨髓单个核细胞,RPMI1640培养液洗3遍,制成细胞
6、悬液,计数备用。试剂硫化砷(As2S2)购自美国Sigma公司,纯度99.99%,以0.2mol/LNaOH溶解,HCl中和滴定至pH7.35-7.45,制成0.1%的储存液,4℃保存。MTT购自美国Sigma公司,临用前以PBS配制成5mg/ml,抽虑除菌,保存在4℃条件下。RT-PCR试剂盒购自晶美公司,AnnexinVFITC试剂盒购于联科生物公司。MTT增殖抑制实验硫化砷分成7种不同浓度(0.3、0.6、1.5、3.0、15、30、50)mg/L组,加上调零孔(没有细胞和药)和对照孔(不加药),共为9组
7、,每组设5个复孔。分离的骨髓单个核细胞以每孔1000-10000个接种到96孔板,每孔体积200μl,培养液为含不同浓度的硫化砷的RPMI1640(含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素);37℃,5%CO2条件下分别培养24、48、72小时,每孔再加入MTT20μl,孵育4小时,小心弃上清,加二甲亚砜150μl振荡溶解10分钟,用酶标仪测490nm波长A值,取5孔A490的均值,计算抑制率。抑制率=(阴性对照的A值-实验孔的A值)/阴性对照的A值×100%。流式细胞术检测分离的骨髓单个
8、核细胞以(2-5)×105/mL浓度接种在含硫化砷的RPMI1640培养液中进行培养(37℃,5%CO2),分别取培养前(0小时)、培养后24小时、48小时的细胞,以AnnexinV-PI进行标记后,用流式细胞仪检测。荧光共聚焦显微镜观察硫化砷处理后的细胞和未经处理的细胞以AnnexinV和PI标记,收集细胞涂片,用荧光共聚焦显微镜观察并拍摄图片。RNA抽提和bcl-2与baxmRNA
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