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时间:2018-11-11
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1、老年人食管鳞状细胞癌、腺癌和化生作者:蔡建春,刘棣,刘凯华,张海萍,钟山,夏宁邵【关键词】癌,鳞状细胞;食管肿瘤,腺癌;微卫星重复;聚合酶链反应;barrett食管;化生;增生;序列分析 摘要:目的评估老年人食管鳞状细胞癌(ESCC)、食管腺癌(EADC)和Barrett化生不典型增生腺癌序列DNA微卫星的改变。方法应用稀释性PCR技术检测老年人ESCC、EADC和Barrett化生不典型增生腺癌序列中D2S123、D3S1616、D3S1300、BATRII、D5S346、D17S787和D18S617个位点DNA微卫星的改变。结果在非稀释DNA中,23例老年人ESCC和18例老年
2、人EADC微卫星不稳定性(MSI)的频率分别是47.8%(11/23例)和38.9%(7/18例),杂合性丢失(LOH)的频率分别是26.1%(6/23例)和16.7%(3/18例),两者的MSI或LOH频率比较没有显著差别(P>0.05)。在稀释DNA中,8例老年人正常食管鳞状上皮和Barrett化生异型增生腺癌序列的MSI和LOH频繁出现,尤其在D3S1616、D2S123、D3S1300和D17S787位点上,与非稀释DNA的MSI和LOH频率相比有显著差别(P<0.05)。结论老年人ESCC和EADC微卫星改变没有差别。老年人正常食管鳞状上皮和Barrett化生异型增生腺癌组织
3、DNA的MSI和LOH普遍存在,它们可能是EADC发生发展的早期分子事件,D3S1616、D2S123、D3S1300和D17S787位点的微卫星改变可能在此过程中起着重要作用。 关键词:癌,鳞状细胞;食管肿瘤,腺癌;微卫星重复;聚合酶链反应;barrett食管;化生;增生;序列分析 Barrett食管发生腺癌危险性是一般人群的125倍,其中间过程是柱状化生上皮向不典型增生上皮转化,称之为Barrett化生不典型增生腺癌序列[12]。食管鳞状细胞癌(ESCC)和食管腺癌(EADC)是老年人的常见病。老年人反流性食管炎合并的Barrett食管比年轻人的更易发生不典型增生和腺癌[3]。
4、为了更好地了解老年人ESCC和EADC的发生发展过程,笔者检测了ESCC、EADC、正常食管鳞状上皮和Barrett化生不典型增生腺癌序列组织中D2S123、D3S1616、D3S1300、BATRII、D5S346、D17S787和D18S617个位点DNA微卫星的改变。 1材料与方法 1.1病例人与标本选自福建医科大学附属厦门第一医院病理科2002年3月~2005年10月存档手术切除食管癌石蜡标本41例,患者年龄(68.2±9.6)岁(60~80.5岁);术前未经过化疗和放疗,标本经福建医科大学附属厦门第一医院伦理委员会批准收集。进行常规组织切片,HE染色和病理诊断。组织病理学
5、分析:23例ESCC,18例EADC,其中8例EADC在癌组织旁同时存在Barrett化生和不典型增生上皮。由2位病理医师进行组织病理学分析并核对。 1.2组织病理学分析、显微切割、DNA提取和DNA稀释先行常规组织切片、HE染色和组织病理学分析,在显微镜下标记所要切割的组织区域。再切厚度为10μm的组织3片,在显微镜下按照HE染色切片上的标记进行显微切割,取出组织,装入0.5mL离心管。余下蜡块组织再行常规切片、HE染色并与切割前的切片比较(图1)。切割不同蜡块时均清洁石蜡切片机刀头和刀片,显微切割不同组织均用不同的洁净器械。采用蛋白酶K(10mmol/LTrisHCl,pH8.0
6、,100mmol/LKCl,2.5mmol/LMgCl2,0.45%Tg/mL蛋白酶K)消化方法提取基因组DNA:组织在50μL蛋白酶K消化液中95℃变性10min,常温冷却1h,然后在65℃孵育1h,最后在95℃变性10min去除多余的蛋白酶K,混合物离心(5000r/min,5min),吸出上清液,移至洁净的离心管。DNA质量测定值在1.0723~1.2401[D(260nm)/D(280nm)],DNA含量为255.36~406.98ng/μL。8例正常鳞状上皮、Barrett化生上皮、不典型增生上皮和EADC组织的DNA分别按1∶100,1∶1000,1∶5000,1∶1000
7、0和1∶50000稀释度用三蒸水进行稀释。 1.3稀释性PCR和微卫星改变7个微卫星位点是D2S123,D3S1616,D3S1300,BATRⅡ,D5S346,D17S787和D18S61(PCR引物购自美国ResearchGeics公司),分别位于hMSH2,hMLH1,FHIT和TGFβRⅡ基因内,MCCAPC基因之间以及p53和DCC基因邻近。每个不同稀释度(1∶100,1∶1000,1∶5000,1∶10000,1∶50000)的P
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