巨噬细胞集落刺激因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的促进作用

《巨噬细胞集落刺激因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的促进作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、巨噬细胞集落刺激因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的促进作用作者：王峰，王先酉，王绮如，周小莹，谭孟群【摘要】　　本研究以内皮细胞培养液（EndoM）培养小鼠骨髓内皮细胞，探讨粒巨噬系集落刺激因子（rmGMCSF）对骨髓内皮细胞增殖的影响。用EndoM培养小鼠骨髓内皮细胞，通过CSF，通过集落形成率、MTT法和流式细胞术检测内皮细胞生长周期，观察GMCSF对内皮细胞体外扩增的影响。结果表明：EndoM诱导的骨髓细胞可以生成内皮细胞集落，vTT法测定均证实GMCSF对内皮细胞的增殖具有明显的促进作用；生长周期检测结果显示，GMCSF处理组的细胞进入S期的比率为9.3%，而对照组为

2、2.1%，说明GMCSF可以通过促使内皮细胞进入S期而加快细胞的分裂，促进细胞增殖；比较第1代和第4次传代后细胞的生长曲线，两者无明显差别，说明多次传代后的细胞仍保持传代早期的增殖潜能。结论：GMCSF对内皮细胞的增殖具有促进作用，经多次扩增传代后内皮细胞的增殖潜能无明显改变。【关键词】骨髓内皮细胞　GMCSF　细胞增殖　　EffectsofGranulocyteMacrophageColonyStimulatingFactoronGroacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)onthegroousebonemarroedium（Endo

3、M）urinebonemarroicroscopebyCSFontheproliferationofbonemarroationofendothelialcellcolonies,MTTandfloetry.TheresultsindicatedthattheendothelialspecificmarkervCSFonpromotingtheproliferationofbonemarrootetheproliferationofbonemarroarroarroatol2007;15(3):622-625目前，已有许多报道证明内皮细胞（endothelialcells,EC）、内

4、皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPC）可以用来治疗缺血性心脏病以及各种疾病引起的肢体缺血［1,2］也可以用于组织工程的血管构建［3］，并取得了一定的成果。Kaoto等［4］报道，EPC对缺血心脏病进行治疗具有良好的效果，一方面减少了缺血组织的面积，同时改善了心脏的功能。Kalka等［5］则报道了利用EPC对肢体缺血的小鼠模型进行治疗，实验结果表明了EPC能显著增加缺血肢体的灌流，而且组织学检查发现缺血部位毛细血管的数目也大大增加。内皮细胞的来源有多种，可以从外周血、脐血及骨髓中获得［6］，而外周血中的内皮祖细胞来源于骨髓。从病人自体的骨髓中获得内皮细胞，

5、一方面来源比较方便，而且也可以避免GVHD的发生。但是由于骨髓基质细胞种类多，难以分离纯化骨髓内皮细胞或内皮祖细胞。本研究用本实验室配制的内皮细胞培养液（EndoM）体外培养小鼠骨髓细胞，分离纯化骨髓内皮细胞及内皮祖细胞，并观察粒巨噬系集落刺激因子（rmGMCSF）对小鼠骨髓内皮细胞体外增殖的影响以及体外增殖后内皮细胞增殖机能的改变，这对临床运用内皮细胞或内皮祖细胞治疗疾病有一定的指导意义。动物昆明小鼠，由中南大学湘雅医学院动物学部提供，雌雄不限，普通饮食。主要试剂和仪器IMDM为Gibco公司产品；新生牛血清购自杭州四季清生物制品研究所；重组小鼠粒巨噬细胞集落刺激因子（rmGM

6、CSF）为RD公司产品；vTT、二甲基亚砜（DMSO）为Sigma公司产品；酶标仪为Aa。小鼠骨髓内皮细胞及内皮细胞集落的培养用颈椎脱臼法处死小鼠，在无菌条件下取出股骨，用IMDM冲出骨髓细胞，制成单细胞悬液，取1×106个小鼠骨髓单个核细胞种入1ml含有15%新生牛血清的EndoM培养体系，置于24孔板中，于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养5天后,用胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，按每孔1×104个细胞种入24孔板，每组3孔。于二氧化碳培养箱内培养15天后计数内皮细胞集落数，以≥50个细胞的聚合计为1个集落。内皮细胞的形态观察及vCSF对小鼠骨髓内皮细胞形成集落的影响取纯化的小鼠

7、骨髓内皮细胞培养于24孔板中，每孔5000个细胞，在基本培养体系（含1%浓度EndoM）的基础上分别加入5、10、25ng/ml的rmGMCSF，对照组不加入GMCSF，每组3孔。置于CO2培养箱培养15天，于倒置显微镜下记数集落数，≥50个细胞的聚合计为1个内皮细胞集落。GMCSF对内皮细胞增殖影响的MTT法测定将纯化的小鼠骨髓内皮细胞按5000个/孔培养于96孔板，每孔0.2ml，每组3孔。实验组培养体系中分别加入5、2