β射线内照射对人增生前列腺细胞凋亡的影响

《β射线内照射对人增生前列腺细胞凋亡的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、β射线内照射对人增生前列腺细胞凋亡的影响作者：谷欣权曹霞孔祥波马庆杰【摘要】目的探讨β射线内照射对人增生前列腺细胞凋亡的影响。方法20例前列腺增生(BPH)患者随机分为4组：对照组未行内照射，3组照射组于前列腺切除术前1，4，7d行90Sr/90Yβ射线内照射，采用TUNEL染色、流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测前列腺细胞凋亡变化。结果与对照组比较，β射线内照射后前列腺细胞凋亡增多，并随时间延长而增加（P＜0.01），对照组基因组DNA保持完整，β射线辐射7d后基因组DNA呈现梯状带凋亡改变。结论β射

2、线内照射能够有效诱发人增生的前列腺细胞凋亡，进而引起前列腺组织萎缩。【关键词】前列腺增生；电离辐射；细胞凋亡【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofβirradiationoncellapoptosisinhumanhyperplasticprostatictissues.Methods20patientsetreatedyorTURP.Thecellapoptosisofhumanhyperplasticprostatictissuesetryanda

3、garosegelelectrophoresis.Resultsparedoreegoing(P＜0.01).DNAkeptpleteincontrolgroupentelectrophoresisandthepositivecellsthatpresentedbrohumanprostatichyperplasiatissueandcausetheatrophyofprostatictissue.【Keyin，TBS洗涤。加含有TdT和DIGdUTP的标记液20μl/片，37℃标记2h，TBS

4、洗涤2min×3次。加封闭液50μl/片室温30min，加封闭液1∶100稀释生物素化抗地高辛抗体50μl/片，37℃反应30min，TBS洗涤。加SABC37℃反应60min，TBS洗涤。DAB显色15min，苏木素复染，常规脱水、透明、封片。显微镜下凋亡阳性细胞核呈深浅不一的棕黄色，正常细胞核呈蓝色，在每张切片上随机选取10个高倍镜视野，计阳性细胞数和细胞总数，计算阳性反应细胞数占细胞总数的平均百分比。1.3FCM检测凋亡细胞DNA含量新鲜组织研磨成单细胞，70%冷乙醇固定，4℃过夜。600r/

5、min离心5min，弃上清，加0.01mol/LPBS5ml，混匀1500r/min离心，弃上清，反复3次。用PBS调整细胞浓度106/ml，过350目滤网，制成单细胞悬液，加入浓度200μg/ml的RNaseA，37℃水浴30min，加入低渗荧光染料溶液混匀，4℃避光染色30min。用流式细胞仪摄取PI荧光，测凋亡细胞核百分率。1.4DNA琼脂糖凝胶电泳组织研碎后，离心去上清，加入10倍体积的DNA抽提液混匀，37℃水浴1h，加入蛋白酶K，50℃水浴3h，12000r/min离心5min，用饱和苯

6、酚抽提上清1次，再用苯酚/氯仿/异丙醇（25∶24∶1）1ml充分混匀，8500r/min离心5min，弃酚相，保留上清，上清中加入3mol/L醋酸钠和冷乙醇，-20℃沉淀过夜。-10℃12000r/min离心10min，将沉淀溶于20μlTE缓冲液，加入1μlRNA酶，37℃保温1h。加4μl样本缓冲液到含有0.4μg/ml溴化乙锭的1%～2%的琼脂糖凝胶的样品孔中，室温、恒流75mA，于1×TAE缓冲液中电泳1～2h，紫外灯下观察实验结果。1.5统计学处理数据应用SPSS11.5统计软件进行统计

7、学处理，组间比较采用t检验。2结果2.1TUNEL法染色检测前列腺细胞凋亡对照组仅见少数散在的凋亡细胞，经90Sr/90Yβ射线辐射后细胞凋亡增多，并随时间而逐渐增加。与间质细胞比较，腺上皮细胞凋亡更加明显，见图1。2.2FCM检测凋亡细胞DNA含量经流式细胞仪分析凋亡细胞的DNA含量，可见对照组凋亡细胞百分率为（1.74±0.35）%，β射线辐射可使前列腺组织细胞周期时相发生改变，在二倍体峰前出现亚二倍体峰即凋亡峰。随时间延长凋亡细胞逐渐增多，辐射1、4、7d凋亡细胞百分率分别为(3.83±0.7

8、4)%，(5.66±1.72)%，(13.15±3.03)%，与对照组比较差异显著（P＜0.01）。2.3DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡对照组基因组DNA保持完整，经β射线辐射7d后基因组DNA发生断裂，呈现典型的凋亡改变即DNA梯形带（DNALadder），表明β射线可使细胞核内DNA在核小体连接处发生断裂，形成180～200bp及其整数倍的核苷酸片段，见图2。图1TUNEL染色检测前列腺组织中细胞凋亡(×400)图2DNA琼脂糖凝胶电泳3讨论细胞凋亡涉及一系列基