rgs4在huevcs凋亡中的作用及地塞米松对其的影响

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1、RGS4在HUEVCs凋亡中的作用及地塞米松对其的影响陈星云，赵艳，李平，熊仁，刘苹，杨楠，周元国【摘要】　　目的研究RGS4对常氧和低氧培养条件下HUEVC细胞凋亡的影响及地塞米松在其中的作用，以探讨RGS4在HUEVC细胞凋亡中的作用及地塞米松处理对其的影响。方法采用O2/N2/CO2三气培养箱模拟常氧和低氧条件培养HUEVC细胞，RGS4真核表达载体转染HUEVC细胞后采用流式细胞仪（AnnexinVFITCPI法）检测细胞凋亡。结果常氧条件下RGS4转染细胞和地塞米松处理对细胞凋亡无明显影响，低氧培养条件下细胞凋亡增加(P0.01)，RGS4转染后可使HUEVC细胞凋亡显著减

2、少(P0.01)，地塞米松和RGS4同时处理后HUEVC细胞的凋亡与单纯RGS4转染无显著差别。结论RGS4不影响常氧条件下的HUEVC细胞凋亡，但可明显抑制低氧条件下的HUEVC细胞凋亡，地塞米松抑制细胞凋亡的作用可能与RGS4有关或者通过相同的细胞信号通路抑制低氧条件下的细胞凋亡。【关键词】细胞凋亡地塞米松RGS4　　AbstractObjectiveTostudytheroleofRGS4inapoptosisofHUEVCsinnormoxiaorhypoxiaandtheeffectofdexamethasoneonit.MethodsHUEVCsulatednormoxiaor

3、hypoxiaofO2/N2/CO2cellincubatorandeter(Annexin-V-FITC-PI)entofdexamethasonehadnoobviouseffectontheapoptosisinnormoxiaethasoneandetimeshothattreatedoxiabutitcaninhibittheapoptosisofHUEVCsinhypoxia;theeffectofdexamethasoneontheapoptosisofHUEVCsisprobablyrelatedtoRGS4,orRGS4anddexamethasoneemploythes

4、amecellsignalingpathethasoneRGS4　　急性肺损伤是肺脏炎症和肺微血管通透性增加的急性、进行性呼吸衰竭，其最终阶段即急性呼吸窘迫综合征。血管内皮细胞是连续性衬在血管腔内面，参与体内许多生理和病理生理过程，如维持血管完整性、分泌和释放活性物质、维持血管张力等。在急性肺损伤过程中，肺微血管的变化尤为引人注目，内皮细胞受损被认为是急性肺损伤发生、发展的病理基础。国内外多项研究表明〔1～4〕，急性肺损伤时内皮细胞发生凋亡，从而导致肺血管内皮－上皮屏障受到破坏，导致血管通透性增加，引起肺水肿和气体交换障碍，地塞米松可以抑制血管内皮细胞的凋亡〔6，7〕，减轻肺损伤。　　　　

5、本研究拟采用HUEVC内皮细胞株，采用常氧和低氧培养，观察RGS4表达质粒转染后皮细胞凋亡和地塞米松处理后内皮细胞凋亡的变化，以阐明RGS4在内皮细胞凋亡中的作用以及地塞米松处理对其的影响。　　1资料与方法　　1.1主要试剂质粒：RGS4inpcDNA3.1(+)(RGS0400000，GUTHRIEcDNAResourceCenter，美国)，pcDNA3.1(+)，质粒大量抽提试剂盒(E.Z.N.A.PlasmidMaxiprepKit，Omega)，LifofectaminPlusTMReagent(Invitrogen，美国)。　　1.2实验分组及指标检测时相点（1）常氧实验分组：

6、1)空白对照组：(controlN1)；2)pcDNA3.1(+)组：(转染pcDNA3.1(+)空质粒，cotrolN2)；3)RGS4转染组：(转染RGS4表达质粒，RGS4N)；4)RGS4转染＋地塞米松处理组(RGS4＋DEXN)；（2）低氧实验分组(1％O2／5％CO2／94N2％)：1)空白对照组：(controlH1)；2)pcDNA3.1(+)组：(转染pcDNA3.1(+)空质粒，cotrolH2)；3)RGS4转染组：(转染RGS4表达质粒，RGS4H)；4)RGS4转染＋地塞米松处理组(10－7M)(RGS4＋DEXH)（3）检测时相点：流式细胞仪检测细胞凋亡分别于低

7、氧处理后6小时、24小时和48小时测定。　　1.3RGS4以及pcDNA3.1(+)质粒的扩增与提取常规方法扩增RGS4与pcDNA3.1(+)质粒并采用质粒提取试剂盒提取质粒以用于转染　　1.4HUEVC细胞的培养取液氮中冻存的HUEVC细胞株，迅速放入40℃水浴中，快速溶解细胞。超净工作台内将细胞悬液移入离涯管中，滴加DMEM培养基至8毫升，洗涤细胞。2000转、离心5分钟、弃上清，用DEME再次洗涤沉淀。沉淀用DE