radp53的抑癌作用及体外转染后抑癌蛋白的表达

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1、rAdp53的抑癌作用及体外转染后抑癌蛋白的表达作者：王建华，纪宗正，闫立昆【摘要】目的为了了解重组人p53腺病毒注射液（商品名“今又生”）对大肠癌174细胞株的体外抑制作用及其半数致死量（IC50），更好地指导临床应用。方法通过体外细胞培养、利用MTT法对比检测重组人p53腺病毒注射液与5氟脲嘧啶、替加氟、顺铂、奥沙利铂、丝裂霉素以及紫杉醇等大肠癌常用化疗药物的IC50，明确重组人p53腺病毒注射液体外抑瘤活性的强弱；利用免疫组化检测技术检测重组人p53腺病毒体外转染大肠癌174细胞株后，细胞凋亡、生长抑

2、制与细胞内p53蛋白表达情况之间的关系。结果重组人p53腺病毒注射液具有良好的体外抑瘤效应，IC50为5.73×1011VP，且有剂量和时间依赖性；但其单用时的体外抑癌远远逊于经典的化疗药物如丝裂霉素、5氟脲嘧啶和顺铂等；五种不同滴度的重组人p53腺病毒注射液在体外大肠癌174细胞株转染过程中皆出现了阳性染色结果，最早的阳性染色结果出现在p53基因转染24小时后，而空白对照组的免疫组化染色皆为阴性。结论重组人p53腺病毒注射液具有明确的体外抑瘤效应，且有剂量和时间依赖性；但其单用时的体外174细胞株的作用低于

3、丝裂霉素、5氧尿嘧啶和顺铂。【关键词】重组人p53腺病毒；细胞培养；MTT检测；基因转染；免疫组织化学　　Abstract：ObjectiveTounderstandtheinhibitionandIC50(50%inhibitingconcentration)oftherebinantadenoviralp53gene(rAdp53)forthecolorectalcancercellsinvitroandtoguideclinicalpractice.MethodsTTchemosensitivityass

4、aytomakesuretheanticancercapabilityofrAdp53.Expressionofp53protEinintransfectioncellsofcolorectalcancerline174munohistochemicalstain.ResultsTherAdp53hasgoodanticancerefficacyforthecolorectalcancercellline174invitro,itsIC50is5.73×1011VP(viralparticles)and

5、itisdosedependentandtimedependent.Butitsanticancerefficacycan′tbeparedicalmedicinemitomycinc,5fluorouracilandcisplatinetalmunohistochemistrystaininblankcontrolgroupisnegative.Hoedependentmanner.Butitsanticancerefficacyicalmedicinemitomycinc,5fluorouraci

6、landcisplatinetc.munohistochemistrystain　　0引言　　目前肿瘤基因治疗领域中研究最多的就是“人类基因组保护神”——抑癌基因p53。p53基因的改变，包括突变和（或）功能异常是肿瘤发生过程中最为常见的遗传变异［1,2］，尤其在结肠癌中更高达75%[3]。2004年我国率先将世界上第一种基因治疗药物——重组人p53腺病毒注射液（rAdp53injection）应用于头颈部肿瘤患者的临床治疗。为了对比了解该注射液对大肠癌细胞株的体外生长抑制作用我们进行了如下试验。　　1材料与方法　

7、　1.1实验材料　　1.1.1实验肿瘤细胞株　　大肠癌174细胞株由西安交通大学医学院病理教研室王一理教授惠赠，最佳细胞接种浓度为（1.5～5.0）×104/ml，对数生长期为接种后的3～5天[4]。　　1.1.2重组人p53腺病毒注射液（rAdp53）　　深圳赛百诺基因技术有限公司产品，为同源重组人p53腺病毒。　　1.2方法　　1.2.1重组人p53腺病毒及临床常用化疗药物对大肠癌细胞体外生长抑制的对比测定（噻唑蓝比色法，即MTT法）。利用细胞存活率（细胞存活率=试验组光吸收值/对照组光吸收值×100%）对药

8、物剂量对数作图并按作图法y=ax+b求出实验药物的IC50[5]。　　1.2.2消化、稀释、接种　　0.25%的胰蛋白酶（GIBCO公司）消化大肠癌174细胞株，并用含10%新生牛血清（北京鼎国）的RPMI1640（GIBCO公司）培养液稀释成浓度为5×104个/ml均匀的单细胞悬液，将其以每孔200μl接种于96孔培养板（美国COSTAR），置于细胞孵育