川芎嗪对胃癌细胞及血管内皮细胞增殖的影响

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1、川芎嗪对胃癌细胞及血管内皮细胞增殖的影响【摘要】　目的研究川芎嗪对SGC7901胃腺癌细胞及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。方法将不同浓度川芎嗪分别加入体外培养的胃癌细胞，在无因子培养基和在条件培养基中培养的HUVEC中，用MTT法检测细胞增殖情况。结果川芎嗪浓度为25～625μg/mL时，对SGC7901胃腺癌细胞和无因子基培养的HUVEC增殖均无影响(P＞0.05)；川芎嗪浓度为125μg/mL作用48、72h、浓度为625μg/mL作用24、48、72h对条件培养基诱导的HUVEC增殖有明显影响(P＜0.05)，增殖抑制率随着药物

2、浓度的增加和作用时间的延长而升高。结论川芎嗪对胃腺癌细胞和血管内皮细胞无直接杀伤作用，但对条件培养基诱导的HUVEC增殖具有抑制作用。【关键词】胃腺癌；血管内皮细胞；川芎嗪；生长抑制剂　胃癌是一种常见的对人类危害较大的疾病，我国在20世纪90年代进行的全国恶性肿瘤死亡率调查表明，胃癌死亡率高居恶性肿瘤死亡率的首位［1］，目前使用手术、化疗、放疗等治疗方法存在许多局限，而且不能有效防治胃癌的转移和复发。川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)是从活血化瘀中药川芎中分离得到的一种生物碱，主要应用于缺血性心、脑血管疾病，毒副作用少。有研究发现［

3、2］，川芎嗪对MKN45人胃癌低分化腺癌细胞有直接的杀伤作用；张薇等［3］的研究则显示川芎嗪能抑制胃癌前病变大鼠新生血管生成，可能对胃癌具有一定的预防和治疗作用。本文拟通过MTT比色法观察川芎嗪对胃癌细胞和血管内皮细胞增殖的影响，初步探讨川芎嗪在胃癌治疗中的作用和意义。　　1材料与方法　　1.1材料RMPI1640培养基(美国Gibco)，SFM培养基(美国Gibco)，胎牛血清(FBS，杭州四季青)，谷氨酰胺(美国Amresco，博理分装)，重组人β内皮细胞生长因子(rhβECGF,美国RD)，F8兔抗人多克隆抗体、FITC羊抗兔IgG(武汉博士德

4、)，盐酸川芎嗪注射液(常州制药厂有限公司，规格：40mg/2mL，批号：0403231)，MTT(美国Amersco，博理分装)。　　1.2方法　　1.2.1胃癌细胞培养SGC7901胃腺癌细胞(购自中国科学院上海细胞库)，用RMPI1640完全培养基(加入10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺)培养。　　1.2.2HUVEC培养采用胰蛋白酶消化法分离获取［45］。用内皮细胞培养基(含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺和1ng/mLrhβECGF的SFM培养基)培养，传代后用第八因子相关抗原免疫荧光染色法进行鉴定。HUVEC第3～6代用于实验。　　1.2.3川

5、芎嗪对细胞增殖影响的检测　　1.2.3.1对胃腺癌细胞增殖的影响SGC7901胃腺癌细胞以1×104个/mL的密度接种于96孔板内，每孔接种100μL，用RMPI1640完全培养基(含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺)培养。培养24h后，吸弃孔中培养基。每块培养板分4组，每组6个复孔。正常对照组加入100μL/孔RMPI1640完全培养基；川芎嗪组则将含川芎嗪25μg/mL，125μg/mL，625μg/mL的RMPI1640培养基依次加入相应的孔中，每孔100μL。药物作用第24、48、72h取出一块培养板，MTT法检测细胞增殖情况(检测490nm处

6、光吸收值)。　　1.2.3.2对无因子培养HUVEC细胞增殖的影响HUVEC以2×104个/mL的密度接种于96孔板内，每孔接种100μL，用SFM完全培养基(含10%胎牛血清和2mM谷氨酰胺)培养。培养24h后，吸弃孔中培养基。每块培养板分4组，每组6个复孔。正常对照组则加入100μL/孔SFM完全培养基；川芎嗪组则将含25μg/mL，125μg/mL，625μg/mL的SFM完全培养基依次加入相应孔中，每孔100μL。分别在药物作用第24、48、72h取出一块培养板，MTT法检测细胞增殖情况(检测490nm处光吸收值)。　　1.2.3.3对胃腺癌细胞

7、条件培养基诱导的HUVEC增殖的影响胃腺癌细胞接种于75cm2培养瓶内，每瓶接种以1.5×106个/mL，加入SFM完全培养基至5mL。培养48h后，将培养上清吸至同一离心管内，1500r/min离心10min。离心后的上清收集于新的离心管内，-20℃冻存备用。　　　　HUVEC以2×104个/mL的密度接种于96孔板内，每孔接种100μL，共接种3个培养板，用SFM完全培养基培养。培养24h后，吸弃孔中培养基。每块培养板分7组，每组6个复孔。正常对照组加入100μL/孔的SFM完全培养基；条件对照组加入100μL/孔的条件培养基(将上述收集的胃腺癌细胞

8、培养上清与SFM完全培养基按1∶1的比例混匀)；川芎嗪组将含川芎嗪终浓度为25μ