as2o3抑制人淋巴瘤raji细胞增殖及vegf表达

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1、As2O3抑制人淋巴瘤Raji细胞增殖及VEGF表达作者：喻镁佳，段勇，刘华，张学美，李惠民【摘要】　　本研究探讨在As2O3作用下人淋巴瘤Raji细胞的增殖及VEGFmRNA表达的变化。采用改良MTT方法观察As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应；采用半定量RT-PCR方法检测As2O3对Raji细胞VEGF121和VEGF165mRNA表达的影响。结果表明：As2O3对Raji细胞的作用表现时间、剂量依赖性的增殖抑制效应，建立回归方程为：IR＝0.531dose+0.481time（P<0.05）。半定量RT-PCR方法检测显示，Raji细胞

2、同时表达VEGF121和VEGF165两种剪切变异体，二者的表达水平相当（VEGF1211.17±0.14；VEGF1651.31±0.19，P＞0.05）。VEGF121和VEGF165mRNA表达量与As2O3作用时间呈负相关关系（rsv121=-0.547，P<0.05;rsv165=-0.632，P<0.05），且VEGF的各异构体对药物的反应具有差异性，VEGF165mRNA表达下调早且有持续性。但在所选浓度组中未发现类似的相关关系（P＞0.05）。结论：As2O3既可抑制Raji细胞生长增殖，亦可通过下调VEGFmRNA表达而产

3、生抗血管新生效应，且小剂量、长时程给药时结果亦然。【关键词】三氧化二砷；淋巴瘤；血管内皮生长因子；血管新生　　InhibitedProliferationofB-lymphomaRajiCellsandDoedtoinvestigatetheeffectsofAs2O3onproliferationofBlymphomaRajicellandtostudytheexpressionchangesofVEGFmRNA.ThemodifiedMTTi-quantitativeRT-PCRRNAinRajicellsexposedtoAs2O3.Theres

4、ultsshoe-dependent.TheVEGF121andVEGF165mRNAexpressionsatchedinexpressionlevels.AftertreatmentofAs2O3at1μmol/Lfor48hours，theexpressionlevelsofVEGF121andVEGF165mRNAonstratednegativecorelationeofexposuretoAs2O3.OtheredifferenceRNAilarcorrelationayexerteditsanti-angiogenesiseffectsb

5、ydoRNAexpressioneveninalo.　　Keyphoma;vascularendothelialgroRNA表达的影响。　　材料和方法　　药物　　As2O3（亚砷酸注射液，哈尔滨伊达药业有限公司产品，批号：20030801）5ml∶5mg，分子量：126，原液浓度8mmol/L，使用时用无菌RPMI1640培养液稀释至所需浓度。　　细胞株的培养和传代　　人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞（上海药物研究所惠赠），接种于含15％灭活小牛血清的新鲜RPMI1640培养液中，置37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养，视生长状况每2-3天

6、对细胞换液传代1次，所有实验均用指数生长期细胞。　　细胞增殖抑制试验　　接种细胞于96孔培养板上，每孔接种量为100μl，细胞密度为6×104/ml，加入不同浓度的As2O3共同温育，同时设定空白及阴性对照，分别于各时间点用MTT方法测定其抑制率。　　抑制率（%）=［（OD阴性孔-OD给药孔）/OD阴性孔］×100%　　VEGFmRNA表达的RT-PCR检测　　按预设时间点收集未加药组（空白对照）及各给药组样本，调整细胞数2×106个，离心弃上清。严格按照试剂盒（RNAexReagentSystems上海华舜生物工程有限公司产品）步骤提取总RNA后，反

7、转录合成cDNA，按RT-PCR试剂盒（TaKaRaRNAPCRKit大连宝生物工程有限公司产品，批号：DRRO24A）对cDNA产物行PCR扩增，体系为：cDNA2μl，上、下游引物各0.5μmol/L，MgCl22.5mmol/L，dNTP2mmol/L，Taq1U/L，10×Buffer2.5μl，加灭菌三蒸馏水至25μl。瞬时离心后置PCR扩增仪上：95℃2分钟预变性；95℃45秒，63℃45秒，72℃45秒，40个循环；72℃延伸5分钟，结束反应。PCR引物由上海博亚生物技术有限公司合成，扩增VEGF的两种剪接变异体：VEGF121和VEGF

8、165，扩增产物均为254bp。上游引物：5′-CCCTGATGAGATCGAGTACATCT