rnai下调survivin及vegf表达抑制胰腺癌细胞增殖、凋亡及血管形成的实验研究

《rnai下调survivin及vegf表达抑制胰腺癌细胞增殖、凋亡及血管形成的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号UDC735．9610博士学位论文学校代码密级10533l矾Ai下调Survivin及VEGF表达抑制胰腺癌细胞增殖、凋亡及血管形成的实验研究EffectsofshRNAtargetedSurvivinandVEGFonproliferation，apoptosisandangiogenesisforhumanDanCreanCcanCercellsJ●ll作者姓名：宋建林学科专业：临床医学研究方向：普通外科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：李宜雄教授论文答辩日期叫答辩委员会主席中南大学二零

2、一三年五月一奄一二，平血月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：整牲嘿丑年』月导日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被

3、查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：j妇师签名妻逊日期：二生d年土月翠日RNAi下调Survivin及VEGF表达抑制胰腺癌细胞增殖、凋亡及血管形成的实验研究摘要：目的：探讨小干扰对蛆(smallinterferingRNA，siRNA)对人胰腺癌细胞株PANC．1Survivin和／或血管内皮生长因子fvascularendot

4、helialgrowthfactor,VEGF)表达的抑制作用，对胰腺癌细胞生长、凋亡的影响；并制备相应的条件培养基作用于人脐静脉内皮细胞(HIⅣEC)，测定抑制人胰腺癌细胞株PANC．1survivin表达后条件培养基对内皮细胞生长、凋亡的影响；方法：分别设计并合成针对Survivin及VEGF的siRNA表达载体，经脂质体转染PANC．1细胞。实时荧光定量PCR和Western．blot半定量检测胰腺癌细胞内Survivin和VEGF的表达情况；采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测转染后PANC．

5、1细胞的增殖，流式细胞仪检测转染后PANC．1细胞的凋亡率；将各组转染后Panc．1细胞培养液收集，作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测HUVEC的增殖，流式细胞仪检测HUVEC的凋亡率。结果：1．成功构建4个针对Survivin的载体(Sl、S2、S3、S4)，SurvivinmRNA及蛋白表达明显下降，其中载体S4抑制效率最高；抑制Survivin表达后胰腺癌细胞Panc．1增殖减慢，细胞凋亡率增加；同时HUVEC(人脐静脉内皮细胞)增殖减慢，细胞凋亡率增加。2．

6、成功构建4个针对VEGF的载体(Vl、V2、V3、V4)，VEGFmRNA及蛋白表达明显下降，其中载体V3抑制效率最高；抑制VEGF表达后胰腺癌细胞Panc．1增殖减慢，细胞凋亡率增加；同时HUVEC(人脐静脉内皮细胞)增殖减慢，细胞凋亡率增加。3．同时抑制Survivin和VEGF表达后，较对照组及单独抑制Survivin或VEGF组，胰腺癌细胞Panc．1增殖显著减慢，细胞凋亡率显著增加；同时HUVEC(人脐静脉内皮细胞)增殖显著减慢，细胞凋亡率显著增加。结论：1．靶向Survivin或VEGF的R

7、NAi能够有效抑制胰腺癌细II胞Survivin的表达，抑制胰腺癌细胞的增殖，增加胰腺癌细胞的凋亡，并通过抑制血管内皮细胞的增殖，增加血管内皮细胞的凋亡，抑制肿瘤血管的形成。2．同时靶向Survivin及VEGF的RNAi能够同时有效抑制胰腺癌细胞Survivin及VEGF的表达，较单独抑制Survivin或VEGF，显著抑制胰腺癌细胞的增殖，增加胰腺癌细胞的凋亡，并通过抑制血管内皮细胞的增殖，显著增加血管内皮细胞的凋亡，抑制肿瘤血管的形成。关键词：Survivin；VEGF；‘RNAi；Panc．1；

8、HUVEC；胰腺癌分类号：735．9IIIEffectsofshRNAtargetedSurvivinandⅦGFonproliferation，apoptosisandangiogenesisforhumanpancreaticcancercellsAbstract：Objective：ToinvestigatetheeffectsofshorthairpinRNA(shRNA)-targetedSurvivinand／orⅦGFinhi