次级淋巴组织趋化因子检测胃癌淋巴结微转移

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1、次级淋巴组织趋化因子检测胃癌淋巴结微转移作者：陈瑾　贾忠　封光华　贺冠海　罗中尧　蔡阳　谢琦　方欣【摘要】　　［目的］探讨次级淋巴组织趋化因子（SLC）mRNA联合检测预测淋巴结微转移对胃癌病人的临床意义。［方法］分别用SLCmRNART-PCR方法、细胞角蛋白CK20免疫组化染色法、常规病理学方法检测2003年至2006年间手术的35例胃癌病人的523个淋巴结。［结果］14例胃癌患者63个淋巴结免疫组化和常规组织学检查未证实淋巴结转移，而SLCmRNA表达减弱，提示存在隐匿性转移。分化差的患者微转移发生率高于分化好的患者。［结论］SLCmRNA联合细胞角

2、蛋白CK20免疫染色以及常规组织学检查可更准确地发现淋巴结微转移灶，有利于判断胃癌病人的预后。【关键词】胃肿瘤　微转移　细胞角蛋白　次级淋巴组织趋化因子　　SecondaryLymphoidTissueChemokinemRNADeterminationofLymphNodeMicrometastasisinPatientseasurementofsecondarylymphoidtissuechemokinemRNAforpredictionmicrometastasisoflymphnodesinpatientsphnodesremovedfrom35

3、casesinedbyimmunohistochemistryofcytokeratinandSLCmRNART-PCR.［Results］In14cases(63lymphnodes)RNAedmicrometastasismunohistochmicalmethodandroutinepathologicalmethod.Theincidenceofmicrometastasisinundifferentiatedcarcinomaa.［Conclusion］Detectionoflymphnodemicrometastasisandaccuracyp

4、redictionofprognosisinpatientsmunohistochemstry,SLCmRNAandroutinehistopathologicalexaminationoflymphnodesarealladopted.Keys;micrometastasis;cytokeratin;secondarylymphoidtissuechemokine局部淋巴结转移是判断胃癌患者预后的最重要因素之一。近年来，研究显示在乳腺癌及结直肠癌患者常规HE染色阴性淋巴结中，分子生物学技术能够发现淋巴结的隐匿性转移，并显示微转移的存在直接影响乳腺癌及结直

5、肠癌病人的预后，但对胃癌患者淋巴结微转移的意义尚有争议，并引起许多学者的关注。本文通过RT?鄄PCR和免疫组织化学染色法分别测定胃癌患者中次级淋巴组织趋化因子（secondarylymphoidtissuechemokine，SLC）SLCmRNA，细胞角蛋白来分析淋巴结微转移的存在，并评估联合分子生物学方法在改善诊断的精确性及预测胃癌病人预后方面的临床意义。1材料及方法1.1标本选取2003年1月~2006年3月期间行根治性切除的35例胃癌患者。所有病人均无远处转移。随访时间为3个月~4年。35例病人共切取淋巴结523个，每个淋巴结的一半经10%福尔马林

6、固定及石蜡包埋，每一蜡块连续切取两片4μm厚组织，分别用作HE染色及细胞角蛋白特殊免疫染色,另一半组织迅速放入冻存管置液氮罐中保存，留待SLCmRNA的测定。原发肿瘤及HE染色证实有转移的5个淋巴结作为阳性对照，而另取胃良性病变的5个淋巴结作为阴性对照。1.2角蛋白免疫组化染色采用鼠单克隆抗体CAM5.2的SAB免疫过氧化酶法。先由有经验的病理学医生在不知临床病理信息的情况下对HE染色切片进行有无转移的观察，然后与免疫组织化学染色切片结果比较。当HE染色漏诊而免疫组化染色证实有淋巴结受累时，称之为微转移1。1.3淋巴结SLCmRNA的测定用TRIZOL试剂

7、RNA提取试剂盒(美国LifeTechnologies公司产品)提取总RNA，测定RNA纯度及浓度并对其完整性进行检测，以总RNA为模板，经逆转录得到cDNA。SLC的PCR引物序列及扩增条件参见Reape等[1]的报道。上游引物5′?鄄ATGGCTCAGTCACTGGCT?鄄3′；下游引物5′?鄄GGCCCTTTAGGGGTCTGT?鄄3′(引物由中科院上海生理研究所合成)，反应条件：预变性94℃，5min，变性94℃，1min，退火55℃，1min，然后延伸72℃，30s，最后一次延伸72℃，5min，共30个循环。产物片段为400bp，用3?鄄磷酸苷

8、油醛脱氢酶G3PDH作内参照，引物序列如下，上游引物：5′?鄄TC