铜绿假单胞菌蹭行运动相关基因的研究

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1、!!卷#$$!年"期%月微生物学报!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$&’()!!*+,-.’)"#$$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!铜绿假单胞菌蹭行运动相关基因的研究单志英徐海津施兴启乔明强"高才昌（南开大学生命科学学院天津"$$$/>）摘要：应用D+转座重组技术研究铜绿假单胞菌（!"#$%&’&()")#*$+,(&")）蹭行运动（1E7F=<7,85’F7(7F;）的相关基因。通过转座突变、表型筛选，得到2个1E7F=<7,85’F7(7F;缺陷或减弱的突变子。

2、经过基因克隆、核苷酸测序研究，鉴定转座子插入到基因组中的位置。结果表明，在其中!个突变子中，转座子分别插入到与G&型菌毛生物合成和功能相关的"个已知基因中（其中有两个突变子转座子插入到同一基因的不同位置），它们是-,./，-,.0，).+1。另外!个突变子中，有"个是转座子分别插入到基因-,.2基因的前端，中部和后端，均引起1E7F=<7,85’F7(7F;功能缺失。另一个突变子中，转座子插入到基因!3>2#>中，引起1E7F=<7,85’F7(7F;功能减弱。!,.2和!3>2#>的编码产物均属于"3类蛋白质，它们的功能是根据其保守的氨基酸基序或基因序列与已知功能基因的相

3、似性推测得出的。但缺乏详细的试验证据。研究结果为-,.2控制1E7=<7,85’F7(7F;提供了有力的证据。并证实基因!3>2#>与1E7F=<7,85’F7(7F;有关。将D+转座重组技术应用到假单胞菌的研究中，国内外均未见报道。由于该技术具有随机单点插入的优点，克服了传统转座子能在染色体上迁移的缺点。保证了表型的改变与转座子插入位点的基因突变的一一对应关系。为进一步研究铜绿假单胞菌1E7F=<7,85’F7(7F;的分子机制奠定基础。关键词：铜绿假单胞菌，D+转座重组技术，蹭行运动中图分类号：H/0文献标识码：I文章编号：$$$>3%#$?（#$$!）$"3铜绿假单胞

4、菌是一种重要的条件致病菌，常在!))#*$+,(&")引起的难治性感染，有临床上引起顽固性、难治性感染，成为临床治疗的意义。一大棘手问题］。［>蹭行运动（1E7F=<7,85’F7(7F;）是由!材料和方法!"!材料毛介导的一种运动。G&型菌毛单胞!"!"!菌种：!))#*$+,(&")JI%2是从一支气管扩张 菌（!"#$%&’&()")#*$+,(端部的纤毛，患者送检的痰中分离所得，经美国全自动微生物分 它介导细菌吸附到宿主胞，并通过自身的析仪&G14K3GDL%$鉴定为!))#*$+,(&")。微量肉汤收缩和伸展而使细菌在上组织或固相表面产生位置移动］，这种运动称为［

5、，1E7F=<7,85’F7(7F;。G&型>#菌毛是由单一基因-,.3的编码产物形成的多聚稀释法测定其对卡那霉素敏感（8O5P）。DGMN$C#0!大肠杆菌（4"56#*,56,)5&.,）为本实验室保存菌QR0""体］，但其组装及功能则需多个基因共同参与，目前［"种。人工转座子、转座酶：均为芬兰赫!"!"#D+D+I有一些环节尚不清楚。研究已经证实，型菌毛及G&尔辛基大学博士惠赠。L6S7(6

6、缺失的突变子感1E7F=<7,85’F7(3制品公司；胰蛋白胨、琼脂粉（）为TU6,+(6F-V686U染性丧失或减弱1E7F=<7,85’F7(7F;还参与了生物［］。!Q7W3公司产品；酵母膏（）为公司产=’X-6BF-YFU6=FZY’7V被膜的形成］，而形成生物被膜则是铜绿假单胞菌［0品。小肠碱性磷酸酶、连接酶、限制性内切酶1!引起难治性感染的最主要的根源］。因此，研究参［%、分子量标准，为公QP#$$$QP>0$$$16K6[6与1E7F=<7,85’F7(7F;的相关基因，揭示7)’R#司产品。其它试剂均为国产分析纯。7F;的分子机制，对于设计相应的药物抑制生物

7、被膜基金项目：国家自然科学基金资助（"$#/$$/0）"通讯作者。1-(：2%3##3#"0$""!$；43567(：57,8976,8976’:;6<’’)=’5)=,作者简介：单志英（>?%"@），女，辽宁丹东人，副研究员，博士。研究方向为分子遗传学。43567(：A<7;7,8B<6,:>%"C=’5其他作者：遇言，张秀明，白艳玲收稿日期：#$$3$23>0，修回日期：#$$"3>$3#$@期单志英等：铜绿假单胞菌蹭行运动相关基因的研究@%?!.2转座子插入位点侧翼的核苷酸测序结果和序列分析对;个&’"()*