耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究.doc

《耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究作者：颜英俊刘华杨明清黄文方【摘要】目的分析我院XXXX年1-12月临床分离34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药相关基因存在状况，为临床抗感染治疗提供依据。方法应用PCR方法检测13种P内酰胺类抗菌药物耐药相关基因，分别为blaTEM、blaSHV.blaCARB.blaOXA10、blaPER.blaVEB.blaGES、blaDHA、blaIMP.blaVIM.blaGIM、blaSPM.oprD2;3种氨基糖昔类修饰酶基因，分别为:aac(6z)I、aac(6‘)II和ant(2”)合酶基因l(int

2、l1)o结果耐药相关基因blaTEM、blaCARB.blaDHA、blaIMP.oprD2.aac(6')I、aac(6‘)II和ant(2J,)LintH阳性率分别为:5.9%、32.4%、14.7%.17.6%、97.1%、21.2%、33.3%、48.5%、3.0%;其余耐药基因均未检测到。结论携带多种耐药相关基因是耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药的重要原因之一，膜孔蛋白基因op「D2缺失不是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。【关键词】铜绿假单胞菌；亚胺培南；P内酰胺酶类；氨基糖昔类修饰酶；整合酶I;耐药基因ABSTRACTObj

3、ectiveToinvestigate34strainsoftheantimicrobialresistaneerelatedgenesofimipenemresistantPseudomonasaeruginosafrompatientsfromJantoDecXXXX年来，由于抗生素泛用和滥用，耐药和多重耐药Pa呈上升趋势。亚胺培南为碳青霉烯类药物，是一种新型的0内酰胺类抗生素，被认为是目前控制某些革兰阴性菌临床感染性疾病最有效的药物之一，但随着广泛使用和过度使用，Pa耐药性也逐渐增加。本文应用分子生物学方法研究我院Pa对常用抗菌药物耐药相关基因的类

4、型和分布流行特点，为临床治疗提供依据。1材料与方法1.1菌株来源与质控菌株34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IMPRPa）来自于XXXX年1月我院住院患者的临床分离标本（包括痰液、尿液、伤口分泌物、脓液和血液等）。质控株为铜绿假单胞菌ATCC27853和大肠埃希菌ATCC25922o1.2株鉴定及药敏试验方法所有菌株均以BDPhoenixlO0全自动微生物分析仪鉴定到种，药敏试验采用BDPhoenix100配套药敏试验复合板，包括阿米卡星、氨节西林/舒巴坦、氨曲南、头鞄嘍月亏、头鞄他噪、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南、哌拉西林、哌

5、拉西林/三瞠巴坦、头孑包毗月亏、四环素和复方磺胺甲口恶瞠共16种抗生素，头匏哌酮/舒巴坦采用KB法。药敏标准按XXXX年版CLSIM100S15规定执行。1.3主要仪器设备与试剂Eppendorfcentrifuge54仃R低温离心机，恒温金属浴（杭州大和公司），MJPeltierThermalCycle「（美国MJResearch公司）,BioRAD电泳仪，BioRAD凝胶成像系统，琼脂糖(Oxoid公司)，1OObpDNALadderMarker(大连宝生物公司)，6x上样缓冲液(北京天为时代)。1.4模板DNA提取采用蛋白酶K消化法。1.5基因扩增

6、应用PCR方法共检测17种耐药相关基因，引物序列见Tab.lo氨基糖昔类基因aac(6')I、aac(6')II、ant(2H)I和整合酶基因intll热循环参数为:93°C预变性2min-93°C30s->55°C30s^72°C60s,共35个循环，最后72°C延伸2mino0内酰胺类耐药相关基因blaDHA和op「D2热循环参数为：93°C预变性3min->93oC30s-55°C30sW2°C60s,共35个循环，最后72°C延伸5mino其余基因热循环参数为：93°C预变性3min^93°C60s-55°C60s->72°C60s,共35个循环

7、，最后729延伸5mino纯水为阴性对照。耐药基因检测试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供。1.6结果判断取10pl扩增产物与2

8、jl6x±样缓冲液混匀，点样于1.5%琼脂糖凝胶,100V电压电泳30min,出现目的条带即为检测基因阳性。2结果2.1IMPRPa的耐药特点IMPRPa除对阿米卡星100%敏感，对哌拉西林和哌拉西林/三瞠巴坦较敏感，敏感率分别为48.39%和55.84%,对其余内酰胺类、氟哇诺酮类、四环素、磺胺类抗生素耐药严重，结果见Tab.2o2.2耐药基因检测结果本组试验IMPRPa中，仃种耐药相关基因检测结果和部分琼脂糖电泳结果分别见

9、Tab.3Fig.1-Fig.5o3讨论近十多年来，由于广谱头孑包菌素及碳青霉烯