耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究

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1、耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药相关基因的研究作者：颜英俊刘华杨明清黄文方【摘要】目的分析我院2005年1～12月临床分离34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药相关基因存在状况，为临床抗感染治疗提供依据。方法应用PCR方法检测13种β内酰胺类抗菌药物耐药相关基因，分别为blaTEM、blaSHV、blaCARB、blaOXA10、blaPER、blaVEB、blaGES、blaDHA、blaIMP、blaVIM、blaGIM、blaSPM、oprD2；3种氨基糖苷类修饰酶基因，分别为：aac(6′)I、aac(6′)II和ant

2、(2")I；整合酶基因I(intI1)。结果耐药相关基因blaTEM、blaCARB、blaDHA、blaIMP、oprD2、aac(6′)I、aac(6′)II和ant(2")I、intI1阳性率分别为：5.9%、32.4%、14.7%、17.6%、97.1%、21.2%、33.3%、48.5%、3.0%；其余耐药基因均未检测到。结论携带多种耐药相关基因是耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对多种抗生素耐药的重要原因之一，膜孔蛋白基因oprD2缺失不是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。【关键词】铜绿假单胞菌；亚胺培南；β内酰胺酶

3、类；氨基糖苷类修饰酶；整合酶I；耐药基因ABSTRACTObjectiveToinvestigate34strainsoftheantimicrobialresistancerelatedgenesofimipenemresistantPseudomonasaeruginosafrompatientsfromJantoDec2005.MethodAntimicrobialresistancerelatedgenesethod,includingblaTEM,blaSHV,blaCARB,blaOXA10,blaPER,blaVEB

4、,blaGES,blaDHA,blaIMP,blaVIM,blaGIM,blaSPM,oprD2,acc(6′)I,aac(6′)II,ant(2")IandintI1.ResultsThepositiverateofantibioticsresistantrelatedgenes,namedblaTEM,blaCARB,blaDHA,blaIMP,oprD2,acc(6′)I,aac(6′)II,ant(2")IandintI1ultipleresistantgenesrelatedtoimipenemaincauseof

5、thePseudomonasaeruginosaresistanttomanyantibotics,aincauseofbacteriaresistanttoimipenem.KEYPRPa)来自于2005年1～12月我院住院患者的临床分离标本(包括痰液、尿液、伤口分泌物、脓液和血液等)。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853和大肠埃希菌ATCC25922。1.2菌株鉴定及药敏试验方法所有菌株均以BDPhoeni×100全自动微生物分析仪鉴定到种，药敏试验采用BDPhoeni×100配套药敏试验复合板，包括阿米卡星、氨苄西林/舒巴坦、

6、氨曲南、头孢噻肟、头孢他啶、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南、哌拉西林、哌拉西林/三唑巴坦、头孢吡肟、四环素和复方磺胺甲口恶唑共16种抗生素，头孢哌酮/舒巴坦采用KB法。药敏标准按2005年版CLSIM100S15规定执行。1.3主要仪器设备与试剂Eppendorfcentrifuge5417R低温离心机，恒温金属浴(杭州大和公司)，MJPeltierThermalCycler(美国MJResearch公司)，BioRAD电泳仪，BioRAD凝胶成像系统，琼脂糖(Oxoid公司)，100bpDNALadd

7、erMarker(大连宝生物公司)，6×上样缓冲液(北京天为时代)。1.4模板DNA提取采用蛋白酶K消化法。1.5基因扩增应用PCR方法共检测17种耐药相关基因，引物序列见Tab.1。氨基糖苷类基因aac(6′)I、aac(6′)II、ant(2")I和整合酶基因intI1热循环参数为：93℃预变性2min→93℃30s→55℃30s→72℃60s，共35个循环，最后72℃延伸2min。β内酰胺类耐药相关基因blaDHA和oprD2热循环参数为：93℃预变性3min→93℃30s→55℃30s→72℃60s，共35个循环，最后7

8、2℃延伸5min。其余基因热循环参数为：93℃预变性3min→93℃60s→55℃60s→72℃60s，共35个循环，最后72℃延伸5min。纯水为阴性对照。耐药基因检测试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供