多重耐药铜绿假单胞菌β－内酰胺类相关耐药基因研究

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1、多重耐药铜绿假单胞菌β－内酰胺类相关耐药基因研究李艳华　高恒强　李鹏　张延强【摘要】目的调查我院2005年临床分离多重耐药铜绿假单胞菌(PA)的耐药性分析并探讨其耐药基因的存在状况。方法对31株临床分离的铜绿假单胞菌用纸片扩散法检测其药敏表型，采用聚合酶链反应(PCR)法检测β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因，并与相关药敏表型比较。结果31株铜绿假单胞菌对16种抗菌药物的耐药率为48．4%~100%；β-内酰胺酶编码基因PER、VIM、CARB、IMP、TEM、OXA-10的检出率分别为6．4%、3．2%、3．2%、3．2%、3．2%、3．2%，未检

2、出GES、SHV、VER基因，31株外膜通道蛋白OprD2基因缺失，检出率为100%。结论本院多重耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素的耐药主要与外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关。?　　【关键词】铜绿假单胞菌；多重耐药；β-内酰胺酶；聚合酶链反应；基因型　　?　　【Abstract】ObjectiveTosurveythedistributionofaminoglycoside-modifyingenzymegenesinmultidrug-resistantpseudomonasaeruginosaisolatedinourhospitalin2005．Me

3、thodsTheantibioticsusceptibilityof31differentantibioticsofP.aeruginosaethod，and31multi-drugresistantstrainsasegenesandtheoutermembraneproteinOprD2geneerasechainreaction(PCR).ResultsResistantratesof31strainsofP.aeruginasagainst16kindsofantibioticrangedfrom48．4%to100%;thedetectionrateof

4、β-lactamasegenePER，VIM，DHA，IMP，TEMandOXA-10embraneproteinOprD2gene.ConclusionResistancetoβ-lactampoundsinP.aeruginasofourhospitalisrelatedtolosttheoutermembraneprotein.?　　【Keyonasaeruginosa;Multidrugresistance;β-Lactamases;Polymerasechainreaction;Genes　　　　铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa，

5、PA)是一种重要的条件致病菌，常常引起呼吸道感染、菌血症、肺炎、泌尿系统感染、烧伤感染和囊性纤维化继发感染等多种疾病。2002年全国细菌耐药性监测网调查显示：PA的分离率为10．3%，仅次于大肠埃希菌而居第二位[1]。由于临床上抗生素的大量使用，铜绿假单胞菌呈现出天然或获得性多重耐药性(multidrugresistance，MDR)，给治疗造成困难。近年来，铜绿假单胞菌对3、4代头孢和亚胺培南在内的多种β内酰胺类抗生素及氨基糖苷类抗生素耐药率一直处于一个比较高的水平，并呈现逐年上升的趋势[1-3]。为了解临床分离多重耐药的PA中耐药情况，收集了本院2005年1~

6、12月临床分离的31株PA，对其进行耐药性的检测，并采用分子生物学技术检测其耐药相关基因，结果报告如下。?　　1材料?　　1．1菌株来源于本院2005年1~12月临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌(MDRP)31株。所有标本均采用法国生物梅里埃公司细菌鉴定仪鉴定菌种。?　　1．2质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853均购自卫生部临床检验中心。?　　1．3MH培养基采用英国Oxoid公司产品。?　　1．4抗生素及药敏纸片头孢他啶(30μg/片，CAZ)、头孢曲松(30μg/片，CRO)、亚胺培南(10μg/片，IMP)、克拉维酸(2mmol

7、/L，CA)、氯唑西林(2mmol/L)、美罗培南(10μg/片，MER)、2-巯基丙酸纸片均购自英国Oxoid公司。?　　1．5微生物鉴定系统VITEK-32法国生物梅里埃公司产品。?　　1．6仪器DNA扩增仪为美国PE公司产品。?　　1．7PCR检测试剂盒由无锡市克隆遗传技术研究所提供。?　　2方法?　　2．1细菌培养、鉴定和保存细菌培养根据临床检验操作规程按常规方法进行，采用VITEK-32全自动微生物鉴定系统鉴定结果；将细菌接种于半固体培养基中，37℃培养24h后置-80℃冰箱保存，以备进行分子学检测。?　　2．2抗生素敏感试验采用纸片扩散法(K-B法)，

8、结果根据美