茶多酚诱导膀胱癌t24细胞株凋亡及上调pten表

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1、茶多酚诱导膀胱癌T24细胞株凋亡及上调PTEN表【摘要】目的探讨茶多酚抑制膀胱癌细胞生长的可能分子机制。方法采用MTT法和流式细胞术，观察膀胱癌细胞系T24经不同浓度的茶多酚处理后对细胞生长以及PTEN蛋白表达的影响。结果茶多酚以剂量依赖的方式抑制膀胱癌细胞的生长，加入0、50、100、200、400μg/ml茶多酚的T24细胞抑制率分别为0%、11.2%、33.4%、36.9%、67.5%。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰，癌细胞出现凋亡，凋亡率分别为6.8%、25.1%、28.6%、36.6%、41.1%;同时，随茶多酚作用浓度的增加

2、，出现G1/S阻滞细胞逐渐增多，细胞分裂增殖指数(PI)降低;而细胞PTEN蛋白表达水平由(37.66±0.49)逐渐增加至(163.92±3.36)(P<0.01)。结论茶多酚对T24细胞生长具有抑制作用，其机制可能是通过上调PTEN蛋白表达影响细胞周期和诱导细胞凋亡。PTEN蛋白表达水平的上调可能具有逆转细胞恶性生物学行为作用。【关键词】茶多酚膀胱癌凋亡PTEN蛋白　　【Abstract】ObjectiveToexplorethemolecularmechanismofinhibitioneffectofteapolypheno

3、lsonthegroacelllines.MethodsMTTassayandfloetry(FCM)analysisacelllines.ResultsToinhibitedthegroanner,underthedosagesof0μg·ml１、50μg·ml１、100μg·ml１、200μg·ml１and400μg·ml１averageinhibitoryrate.ApoptosisrateadeG1phasecellmarkedlyincreasingandthecellproliferatingindex(Pl)als

4、odecreased.Atthesametime,theexpressionofPTENincreasedfrom37.66±0.49to163.92±3.36(P<0.01)ent.ConclusionTPhastheinhibitoryeffectsonthecellulargroechanismmaybeassociatedorcelllines.Atthesametime,theup-regulationofthePTEN'sexpressionbyTPalsohasapossiblereversingeffectsonma

5、lignanttumorcells.　　【KeyI1640(Sigma,USA)培养液中37℃、5%CO2培养。　　1.2MTT法观察用含10%小牛血清的RPMI1640培养液，分别将2种对数生长期的膀胱癌细胞调配成5×104/ml的单细胞悬液，接种于96孔板(0.2ml/孔)。设空白阴性对照及不同浓度(50、100、200、400μg／ml)的TP组(中国茶叶研究所)，各设5个平行孔，培养48h，实验终止前4h加入MTT(Sigma,USA)液(5mg/ml)10μl/孔，反应完毕弃上清液加入DMSO100μl/孔溶解沉淀，轻轻振动后用

6、波长570nm的酶联仪测定各孔的OD值，求出生长抑制率IR=(1-用药组平均OD值/对照组平均OD值)×100%。上述所有实验均重复3次。　　1.3流式细胞仪测定(FCM)取对数生长期的膀胱癌细胞，取1×106/ml细胞接种到96孔培养板(0.2ml/孔)，每组3孔。加入不同浓度的TP，并各设2个平行组为TP组；另外，加入等体积生理盐水的RPMI1640细胞培养液设为对照组。培养48h后，以0.25%胰蛋白酶(Sigma,USA)消化，制成细胞悬液，TP组和对照组分别进行下列检测：(1)PBS洗涤2次，加入10mg/LRNaseA200μ

7、l，水浴30min，碘化丙啶染色30min，4℃避光。FCM(BD,USA)检测细胞周期，并计算细胞分裂增殖指数(PI)=(S+G2M)/(G1+S+G2M)×100%。(2)平行组和对照组分别加入鼠抗人PTEN(MBI,USA)20μl，PBS洗涤5min×3次。加入FITC标记的羊抗鼠IgG(Zymed,USA)，37℃孵育30min，PBS冲洗5min×3次。对照组1：40稀释的羊抗鼠IgG-FITC抗体20μl。4℃孵育30min后，FCM检测膀胱癌细胞PTEN的表达，并以荧光强度的几何均数表示。(3)平等组和对照组分别Celle

8、guest软件分析FLA直方图获取的阳性标记细胞的凋亡率(APO)。上述所有实验均重复3次。　　1.4统计学处理结果以均数±标准差(x±s)表示，运用SPSS10.0软件中的组间采用t检验。