对照检测病原体单细胞悬液的制作与保存

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1、对照检测病原体单细胞悬液的制作与保存作者：任兴昌,卢晴晴,陈洪勋【关键词】病原体;单细胞悬液；染色　　ThePreparationandPreservationofSingleCellSuspensionofPathogenic　　　Keyin。→3000r／min离心10min后，弃上清。→用生理盐水(含肝素)清洗，3000r／min离心10min，弃上清，重复此步骤2次～3次→加1倍～5倍保存液，震荡混匀，4℃冰箱保存。→取混合液1滴于玻片，常规HE染色。→烘干，中性树肢封片，显微镜镜检。　　1．2.2肾小管上皮细胞培养物单细胞悬液的制作将培养物

2、连同液体培养基一起加入50ml离心管，2000r／min离心10min，去上清。→加入PBS缓冲溶液清洗培养基，2000r／min离心10min，去上清液，重复此步骤2次。→加入适量PBS缓冲溶液，并加入1／10量的70％乙醇溶液进行固定。→2000r／min离心10min，去上清。→加入适量PBS缓冲溶液，2000r／min离心10min，去上清。重复此步骤2次。→加1倍～5倍组织量的保存液，震荡混匀后，4℃冰箱保存。→取少许于玻片上，常规HE染色。→烘干，中性树胶封片，显微镜镜检。　　1．2．3肾结核(病变组织已固定)单细胞悬液的制作取50ml离

3、心管2支，加入已固定的和机械绞碎的富含结核杆菌的组织。→将已固定的肾结核以3300r/min离心15min，去上清。→加入PBS缓冲溶液清洗，3300r／min离心15min，去上清。→重复此步骤2次～3次。→加1倍～5倍保存液，震荡混匀，4℃冰箱保存。→取少许于玻片上，ZiehlNeelsen抗酸杆菌染色。→烘干，中性树胶封片，显微镜镜检。　　1．2．410％甲醛固定的尖锐湿疣组织单细胞悬液的制作取已固定的尖锐湿疣组织，用PBS缓冲溶液漂洗，然后将其切碎成为1mm2～5mm2左右的小块，280目筛网过滤。→将过滤后的混合液2000r／min，离心

4、10min，去上清。→加入30倍～50倍组织量的胶原酶Ⅱ，密封。→离心管放入37℃恒温箱，每隔30min振摇一次，消化24h，→2000r／min离心10min，去上清。→加入PBS缓冲溶液清洗，2000r/min离心10min，去上清。→重复此步骤2次。→加入2．5倍组织量红细胞裂解液，震荡混匀10min～15min，进行充分裂解。→2000r／min离心10min，去上清。→加入PBS缓冲溶液清洗，2000r／min离心10min，去上清。→重复此步骤2次。→加入1倍～5倍组织量保存液，震荡混匀，置于4℃冰箱保存。→取少许于玻片上，常规HE染色。

5、→烘干，中性树胶封片，显微镜镜检。　　1．2.5外周血淋巴细胞培养物单细胞悬液制作取适量外周血淋巴细胞培养物于50ml离心管中，加入2．5倍组织量的红细胞裂解液进行红细胞裂解。→震荡器混匀10min～15min，充分裂解。→3000r／min离心10min后，去上清。加入2．5倍红细胞裂解液，震荡混匀10min～15min，重复此步骤2次。→3000r／min离心10min，去上清。→加适量生理盐水(含肝素)，加入1／5倍组织量的70％乙醇溶液固定30min。→3000r/min离心10min，去上清。→加适量生理盐水(含肝素)，加2滴～3滴10％甲

6、醛固定10min。→3000r／min离心10min，去上清。→生理盐水(含肝素)3000r／min离心10min，去上清。→重复此步骤2次。→加入1倍～5倍保存液，震荡混匀，4℃冰箱保存。→取少许于玻片上，常规HE染色。→烘干，中性树胶封片，显微镜镜检。　　2实验结果　　　　将不同的实验材料做成单细胞悬液，按照一定的浓度比例(一般是1∶1～1∶5)保存在保存液中。镜检后的结果基本有效的反映了材料的真实情况。　　2．1白色假丝酵母菌单细胞悬液制作后的白色假丝酵母单细胞悬液，经过常规HE染色后镜检，可以看到大量的菌体以一定的均匀度分布于镜下，细胞分散良

7、好，染色均匀，大大提高了观察效率。　　2．2肾小管上皮细胞培养物单细胞悬液肾小管上皮细胞培养物是很好的实验材料，将其制成单细胞悬液后，经常规HE染色后镜检，可以看见肾小管上皮细胞均匀分布于玻片上，形态清楚，镜检效果良好。　　2．3肾结核单细胞悬液肾结核是从肾结核患者的肾病变组织中直接取出，它含有大量的干酪类物质，在一定程度上会影响对肾结核杆菌的镜检效果。将其制成单细胞悬液，经ZiehlNeelsen抗酸杆菌染色后，可见大量的杆菌分布于玻片上，杂质大大减少，能很好的进行镜检。　　2．410％甲醛固定的尖锐湿疣组织单细胞悬液尖锐湿疣组织经切碎过滤后加入

8、胶原酶Ⅱ，有效消化细胞间质，从而达到分散细胞的目的。常规HE染色后镜检，可观察到细胞呈单个或小型细胞团块分布